Fractalkine在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)中的作用.pdf

1、目的:
　　觀察血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)細(xì)胞活力及Fractalkine(FKN)和細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）蛋白表達(dá)的影響，通過小RNA干擾技術(shù)阻斷內(nèi)皮細(xì)胞FKNmRNA的表達(dá)，研究FKN在AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1蛋白表達(dá)中的作用。
　　方法:
　　取生長良好的HUVECs，分別給予低（10-7mol/l）、高(10-6mol/l)濃度的AngⅡ干預(yù)0、12、24、4

2、8小時(shí)，采用MTT法檢測內(nèi)皮細(xì)胞活力，Western blotting法檢測ICAM-1和FKN蛋白的表達(dá);采用小RNA干擾技術(shù)，根據(jù)FKN mRNA序列，選擇3個(gè)靶點(diǎn)，合成3條FKN siRNA片段，通過脂質(zhì)體(lipofectamine2000)轉(zhuǎn)染至內(nèi)皮細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time PCR)檢測內(nèi)皮細(xì)胞FKNmRNA表達(dá)情況并篩選出有效片段;采用有效的FKN siRNA片段轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞后，通過高濃度AngⅡ(10-

3、6mol/l)干預(yù)24小時(shí)，RT-PCR檢測各組內(nèi)皮細(xì)胞FKN mRNA表達(dá)，Western blotting法檢測內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1及FKN蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1）低、高濃度的AngⅡ均可降低HUVECs的活力;相同時(shí)間下，高濃度較低濃度AngⅡ?qū)?nèi)皮細(xì)胞活力影響大;相同濃度下，內(nèi)皮細(xì)胞活力隨AngⅡ作用時(shí)間延長而減低;
　　2）低、高濃度的AngⅡ均可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和FKN蛋白表達(dá);高濃度較低

4、濃度更能有效的刺激內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和FKN蛋白表達(dá);ICAM-1和FKN蛋白表達(dá)隨AngⅡ作用時(shí)間延長而增加;
　　3）FKN siRNA-lipo2000轉(zhuǎn)染HUVECs后，F(xiàn)KN mRNA表達(dá)量較對照組顯著下降，且繼續(xù)予以高濃度AngⅡ(10-6mol/l)干預(yù)24小時(shí)，F(xiàn)KN siRNA+AngⅡ組表達(dá)較陰性對照+AngⅡ組顯著減少，且伴有ICAM-1及FKN蛋白表達(dá)減少。
　　結(jié)論:
　　1）AngⅡ可降低