鹽酸法舒地爾對內(nèi)毒素致大鼠急性腎損傷的防治作用研究.pdf

1、目的：
　　 通過腹腔注射內(nèi)毒素（lipopolysaccharide，LPS）建立大鼠急性腎損傷（Acute kidney injury，AKI）模型，探討鹽酸法舒地爾（Fasudil hydrochloride，F(xiàn)asudil）對AKI大鼠血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、內(nèi)皮素-1（Endothelin-1，ET-1）、腎組織Rho激酶-I（Rho kinases-

2、I，ROCK-I）及核轉(zhuǎn)錄因子-Kappa B p65（Nuclear Transcription Factor ofKappa B p65，NF-κB p65）變化的影響，研究Fasudil在AKI中的腎臟保護作用。
　　 方法：
　　 健康雄性清潔級Wister大鼠65只隨機分為空白對照組、AKI模型組和治療組。
　　 對照組：共5只。1ml生理鹽水腹腔注射。
　　 模型組：共30只。再隨機分為6個時

3、間點（1h，6h，12h，24h，48h，72h），每個時間點各5只大鼠。LPS，6mg/kg體質(zhì)量，生理鹽水稀釋至1ml，腹腔注射，建立AKI模型。
　　 治療組：共30只。再隨機分為6個時間點（1h，6h，12h，24h，48h，72h），每個時間點各5只大鼠。各組在注射LPS1小時前給予Fasudil30mg/kg體質(zhì)量，同樣生理鹽水稀釋至1ml，腹腔注射。其中48h及72h組每24h追加Fasudil30mg/kg。

4、r>　　 各組根據(jù)不同的時間點觀察1h-72h不等，并在相應(yīng)時間點采血5ml后處死大鼠。測定血漿內(nèi)毒素水平，血清肌酐（Cretonnes，CRE）、尿素氮（bloodurea nitrogen，BUN），應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法（enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA）檢測各組血清TNF-α、ET-1的濃度含量。免疫組化方法檢測腎組織ROCK-I、NF-κB p65的表達。光學顯微鏡同步觀察各組大鼠腎

5、臟病理改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.血清CRE及BUN變化的比較：模型組CRE、BUN于6h明顯升高，與對照組相比，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；并于24h達到高峰，48h則顯著下降。治療組各時間點CRE、BUN變化不如模型組相應(yīng)時間點升高明顯。模型12h，24h組CRE、BUN與治療12h，24h組相比，有顯著性差異（P<0.01）。
　　 2.血清TNF-α變化比較：模型組血清TNF-α濃度于1h立即顯著升

6、高，與對照組相比有顯著性差異（P<0.01），然后迅速下降，6h及其以后時間點則一直處于比較低的水平，呈陡直的單峰曲線：而治療組各時間點中TNF-α濃度變化不如模型組明顯，模型1h組TNF-α濃度與治療1h組相比有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 3.血清ET-1變化比較：模型組血清ET-1濃度于1h顯著升高，與對照組相比有顯著性差異（P<0.01），并于12h達高峰，然后開始下降，72h基本降至正常。模型6h，12h，24h

7、組ET-1的變化與治療組相應(yīng)時間點比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 4.血漿LPS變化比較：模型組及治療組中血漿LPS水平于1h迅速增加，與對照組相比有顯著性差異（P<0.01），并于6h達高峰，12h則迅速下降，模型組與治療組相應(yīng)時間點相比均無統(tǒng)計學差異。
　　 5.腎組織ROCK-I表達變化的比較：對照組ROCK-I在腎小管上皮細胞中顯示微量表達：模型1h組Rock-I陽性表達面積顯著升高，與對照組相比，差異

8、有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；并于12h達高峰，24h開始下降。模型6h，12h，24h，48h組Rock-I陽性表達面積與治療組相應(yīng)時間點比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 6.腎組織NF-κB p65表達變化的比較：對照組顯示NF-κB p65在腎小球及腎小管中有微量表達。模型組NF-κB p65陽性表達面積于1h立即增加，與對照組相比有顯著性差異（P<0.01），并于12h達高峰，24h組則顯著下降。模型1h，6h，

9、12h，24h組陽性表達面積與治療組相應(yīng)時間點比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 7.病理切片對照：模型組早期腎小球大致正常，腎小管上皮細胞腫脹、脂肪變性和空泡變性，晚期出現(xiàn)不同程度腎小管上皮細胞壞死，細胞核固縮、溶解、消失。壞死的腎小管上皮脫落入管腔內(nèi)，呈模糊的顆粒狀結(jié)構(gòu)。小管周圍的間質(zhì)充血、水腫及炎性細胞浸潤。治療組出現(xiàn)部分腎小管上皮細胞腫脹、少量變性與壞死，腎間質(zhì)無明顯改變及炎細胞浸潤。
　　 8.腎小管壞死

10、評分：模型組于1h即出現(xiàn)嚴重的腎臟病理損傷，并于24h達高峰。模型1h組腎小管壞死評分明顯升高，與對照組相比有顯著性差異（P<0.01）。模型組各時間點的腎小管壞死評分與治療組相比均有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 Fasudl可能是通過阻斷Rho/Rho激酶通路及NF-κB p65途徑，降低ET-1和炎性細胞因子TNF-α的表達水平，改善腎功能，減輕LPS導致的腎損傷，對LPS導致的大鼠AKI時腎臟具