冬凌草甲素對人胃癌BGC-823細胞抗腫瘤作用及機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討天然植物冬凌草的主要活性成分—冬凌草甲素（Oridonin）的抗胃癌作用及其機制，為開發(fā)高效、低毒的抗胃癌新藥，提供實驗資料和理論依據(jù)。
　　方法：
　　應用人低分化胃腺癌 BGC-823細胞系進行體外細胞實驗，應用移植瘤裸鼠模型進行體內動物實驗，共兩部分內容。體外實驗：
　?、俨捎肕TT法檢測增殖抑制率。
　　②倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化，探討冬凌草甲素對胃癌細胞增殖和的影響；
　

2、?、勖庖呒毎瘜W方法，測定冬凌草甲素對胃癌細胞VEGF蛋白表達的影響。
　　體內實驗：
　?、僦苽渎闶笠浦擦瞿Ｐ停M行體外藥敏實驗，測定腫瘤生長抑制率。
　?、谕ㄟ^腫瘤組織切片進行HE染色光鏡形態(tài)學觀察。
　?、跼T-PCR和免疫組化方法檢測血管內皮細胞生長因子（VEGF）、整合素β3(Integrin-β3)、細胞核增殖相關抗原（PCNA）的表達，并分析它們與腫瘤內部微血管數(shù)量（CD31）的關系。從而進一步探討

3、冬凌草甲素對胃癌微血管生成的影響，明確其體內抗腫瘤作用及分子機制。體外細胞藥敏實驗與體內動物實驗相結合，從分子、細胞、整體水平系統(tǒng)地揭示冬凌草甲素對胃癌的抗腫瘤作用及其機制。
　　結果體外抗腫瘤實驗：
　　①MTT藥物敏感性檢測發(fā)現(xiàn)，冬凌草甲素能以時間和濃度依賴的方式抑制BGC-823細胞的增殖。12h、24h、48h和72h的中效抑制濃度分別為17.08±2.38μg/ml、12.41±1.97μg/ml、9.52±0.9

4、3μg/ml和8.76±0.90μg/ml。濃度6μg/ml以下抑制效果較弱，而12μg/ml~48μg/ml抑制效果顯著提高，48μg/ml以上抑制率增高不顯著。
　　②倒置顯微鏡下動態(tài)觀察表明，冬凌草甲素作用后，細胞密度降低，增殖減弱；細胞突起減少，細胞變圓、變?。患毎N壁差，出現(xiàn)懸浮細胞。AO/EB染色可見細胞核固縮、染色質邊集，核碎裂、溶解等凋亡、壞死表現(xiàn)。形態(tài)學改變與冬凌草甲素的濃度及作用時間均呈正相關。
　?、跙

5、GC-823細胞經冬凌草甲素作用后VEGF蛋白表達逐漸降低。
　　體內抗腫瘤實驗：
　?、俣璨菁姿貙β闶笠浦擦鼍哂忻黠@的抑瘤效應，低劑量、中劑量和高劑量組的抑瘤率分別為25.73％、45.05%和63.54%，與生理鹽水形成鮮明的對照（P<0.05），且各濃度組之間，隨著劑量增加，抑瘤率顯著增高（P<0.05）。
　?、诠忡R下顯示，治療組瘤細胞呈現(xiàn)出不同程度的退行性變，核深染、固縮，局灶性壞死及單個細胞死亡。

6、　?、叟c陰性對照組比較，冬凌草甲素低、中、高劑量分別作用14天后，VEGF mRNA、Integrin-β3 mRNA水平逐漸降低（P<0.05），并呈劑量依賴關系；同時，隨著藥物劑量的增加，腫瘤細胞的PCNA、VEGF、CD31蛋白表達逐漸減少（P<0.05）。
　　結論：
　　體外細胞實驗與體內移植瘤研究提示，冬凌草甲素對人胃癌BGC-823細胞株及其裸鼠移植瘤均有顯著的抗腫瘤作用。其抗腫瘤機制可能與抑制腫瘤細胞增殖、減