甘草多糖對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　大量研究表明多糖在抗腫瘤研究過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，其中甘草多糖在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)對(duì)腫瘤增殖具有抑制作用。然而甘草多糖抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制尚不清楚，為此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給予人胃癌BGC-823細(xì)胞甘草多糖低、中、高劑量組，干預(yù)人胃癌BGC-823細(xì)胞的增殖過(guò)程，分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中Bax、caspase-3、細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá)，來(lái)初步探討甘草多糖對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的抑制作用機(jī)制。
　　方法:
　　用不同

2、濃度的甘草多糖干預(yù)人胃癌BGC-823細(xì)胞的增殖過(guò)程，瑞氏吉姆薩染色的方法觀察細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定生長(zhǎng)曲線、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的情況，采用免疫細(xì)胞化學(xué)(ABC)法檢測(cè)用藥前后細(xì)胞中Bax、caspase-3、細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.瑞氏吉姆薩染色法結(jié)果
　　倒置顯微鏡下觀察未經(jīng)甘草多糖干預(yù)的人胃癌BGC-823細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)為多角形，

3、大小均勻，細(xì)胞間的結(jié)構(gòu)較為緊密，輪廓邊界清晰可見(jiàn)。經(jīng)過(guò)甘草多糖低、中、高劑量組干預(yù)24h后的人胃癌BGC-823細(xì)胞，數(shù)量明顯減少，特別是隨著甘草多糖濃度的增高，細(xì)胞生長(zhǎng)受到了明顯的抑制，形態(tài)大小不一，間隙增大，分布稀疏，細(xì)胞核出現(xiàn)固縮的現(xiàn)象，胞漿明顯減少，染色質(zhì)凝聚呈現(xiàn)深紫色。
　　2.細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定生長(zhǎng)曲線結(jié)果
　　甘草多糖低、中、高劑量組作用24小時(shí)后用藥各組的細(xì)胞增長(zhǎng)速度均低于空白對(duì)照組，甘草多糖不同濃度組，隨著作用

4、時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的生長(zhǎng)速度明顯降低，說(shuō)明甘草多糖對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞的抑制作用不僅有量效關(guān)系，亦有明顯的時(shí)效關(guān)系。
　　3.MTT法結(jié)果
　　不同濃度的甘草多糖對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖具有抑制作用，且抑制作用跟甘草多糖的濃度與作用時(shí)間呈現(xiàn)明顯的依賴關(guān)系。隨著甘草多糖濃度的增高與作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用明顯增加。甘草多糖低、中、高對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞作用24小時(shí)后的生長(zhǎng)抑制率分別為0.113±0.012、0.

5、467±0.057、0.797±0.075，作用48小時(shí)后的生長(zhǎng)抑制率分別為0.179±0.009、0.79±0.003、0.889±0.01，作用72小時(shí)后的生長(zhǎng)抑制率分別為0.587±0.069、0.92±0.017、0.954±0.004。各個(gè)用藥組與空白對(duì)照組比較，差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.免疫細(xì)胞化學(xué)法染色結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照組與甘草多糖低、中、高劑量組中Bax、細(xì)胞色素C以及Casp

6、ase-3的陽(yáng)性表達(dá)均很少。其中空白對(duì)照組中Bax的陽(yáng)性表達(dá)率0.075±0.019,甘草多糖低、中、高劑量組Bax的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0.229±0.025、0.314±0.109、0.722±0.197，甘草多糖低、中、高劑量組與空白對(duì)照組相比差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。空白對(duì)照組中細(xì)胞色素C的陽(yáng)性表達(dá)率為0.026±0.011，甘草多糖低、中、高劑量組中細(xì)胞色素C的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0.104±0.023、0.266±0

7、.082、0.376±0.101，甘草多糖低劑量組與空白對(duì)照組相比差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;甘草多糖中、高劑量組與空白對(duì)照組相比具有極顯著性差異（P＜0.01）?？瞻讓?duì)照組中Caspase-3的陽(yáng)性表達(dá)率為0.039±0.012，甘草多糖低、中、高劑量組的Caspase-3的陽(yáng)性表達(dá)率為分別為0.139±0.025、0.293±0.049、0.544±0.048，甘草多糖低、中、高劑量組與空白對(duì)照組相比差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.甘草多糖低、中、高劑量組能夠影響人胃癌BGC-823細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，使細(xì)胞大小不一，間隙增大，細(xì)胞數(shù)量隨著甘草多糖濃度的增高逐漸減少，細(xì)胞之間逐漸脫離，分布稀疏，細(xì)胞核固縮，胞漿減少，染色質(zhì)凝聚，染色為深紫色。
　　2.甘草多糖低、中、高劑量組對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞的增殖均有抑制作用，并且抑制作用與干預(yù)的濃度、時(shí)間正相關(guān)，即隨著甘草多糖濃度的增高與作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作