17-AAG對人胃癌細胞株BGC-823增殖和凋亡的影響及其機制研究.pdf

1、胃癌是一種常見的消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，嚴重威脅著人類的生命健康。尋找有效的胃癌治療方法，提高胃癌患者的生存率和生活質(zhì)量迫在眉睫。Hsp90是一種重要的熱休克分子伴侶蛋白，可以調(diào)控和維持多種蛋白的構(gòu)象和功能。因此，Hsp90抑制劑通過調(diào)控蛋白的表達來影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本實驗選取人胃癌細胞株BGC-823作為研究對象，探討Hsp90抑制劑17-AAG對人胃癌細胞增殖及凋亡的影響并了解其相關(guān)機制。
　　第一部分、17-AAG對人胃癌細

2、胞株BGC-823增殖的影響
　　目的:研究17-AAG對人胃癌細胞株BGC-823增殖的影響及其機制。
　　方法:
　　1.以不同濃度的17-AAG作用于對數(shù)生長期的人胃癌細胞株BGC-823，在不同的作用時間點通過MTT比色法檢測其光密度（OD值）;
　　2.采用MTT比色法測定活細胞數(shù)量，繪制經(jīng)17-AAG作用后人胃癌細胞株BGC-823的生長曲線，觀察藥物對細胞生長的長期作用;
　　3.平板克隆實驗

3、檢測17-AAG對單個細胞增殖能力的影響;
　　4.采用流式細胞分析術(shù)對1000 nmol/L17-AAG作用48h后BGC-823的細胞周期進行分析;
　　5.Western Blot技術(shù)檢測增殖相關(guān)蛋白的表達并分析17-AAG的作用機制。
　　結(jié)果:
　　1.MTT法結(jié)果顯示17-AAG抑制人胃癌細胞株BGC-823的增殖，且其抑制作用隨著作用時間的延長而增強，濃度越高其抑制作用也越強。
　　2.生長曲

4、線實驗結(jié)果證實17-AAG有長期抑制人胃癌細胞株BGC-823生長的作用。
　　3.平板克隆形成實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)人胃癌細胞株BGC-823培養(yǎng)11天后克隆形成率為57.29％，17-AAG100 nmol/L和1000 nmol/L藥物處理組的克隆形成率分別下降至53.38％和8.08％，與空白對照組相比具有極顯著性差異(P＜0.01)。
　　4.17-AAG1000 nmol/L作用細胞48h后，G1期細胞數(shù)量明顯減少，(P＜

5、0.05)，S期細胞數(shù)量與對照組相比則增多，與對照組相比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.17-AAG可以上調(diào)蛋白CDK4的表達、下調(diào)蛋白PCNA的表達。而17-AAG對蛋白Akt1和MIF的表達均為抑制作用。
　　結(jié)論:
　　1.17-AAG對BGC-823細胞生長的抑制作用呈時間和濃度依賴性，且這種抑制作用持續(xù)時間長;
　　2.17-AAG降低BGC-823細胞平板克隆形成能力;
　　3.

6、17-AAG可以干擾人胃癌細胞株BGC-823的細胞周期;
　　4.17-AAG抑制細胞增殖與引起細胞周期阻滯有關(guān)，其干擾細胞周期進程可能與上調(diào)蛋白CDK4和下調(diào)蛋白PCNA的表達有關(guān);
　　5.17-AAG抑制細胞增殖還與下調(diào)MIF的表達，抑制Akt通路的激活有關(guān)。
　　第二部分、17-AAG對人胃癌細胞株BGC-823凋亡的影響
　　目的:研究17-AAG對人胃癌細胞株BGC-823凋亡的影響及其相關(guān)機制。<

7、br>　　方法:
　　1.在光學(xué)顯微鏡下觀察17-AAG對人胃癌細胞株BGC-823形態(tài)的影響;
　　2.采取DAPI染色的方法觀察17-AAG誘導(dǎo)BGC-823細胞凋亡的現(xiàn)象;
　　3.Western Blot技術(shù)檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達并分析17-AAG的作用機制。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)不同濃度的17-AAG作用48h后，人胃癌細胞株BGC-823部分脫壁漂浮于培養(yǎng)液中，貼壁細胞也出現(xiàn)變圓皺縮的現(xiàn)象。<

8、br>　　2.DAPI染色法結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加，BGC-823細胞的凋亡程度逐漸增強。凋亡細胞出現(xiàn)細胞核固縮，染色質(zhì)致密，藍色熒光增強的現(xiàn)象，甚至出現(xiàn)凋亡小體。
　　3.17-AAG誘導(dǎo)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達減少，促凋亡蛋白Bax和p53的表達增多。隨著藥物濃度的升高的凋亡促進蛋白與凋亡抑制蛋白的比值(Bax/Bcl-2)逐漸增大。
　　結(jié)論:
　　1.17-AAG作用于BGC-823會使細胞形態(tài)發(fā)生改