安徽省部分地區(qū)漢族人家族性與散發(fā)性肥厚型心肌病MYH7基因18及20號(hào)外顯子突變分析.pdf

1、背景：家族性肥厚型心肌病(famlial hypertrophic cardiomyopathy，F(xiàn)HCM)是一種常染色體顯性遺傳病，單一責(zé)任等位基因突變即可致病。全部病例報(bào)道中家族性患者約為50％，散發(fā)病例約占45％。近年來(lái)的研究已發(fā)現(xiàn)FHCM有至少15種致病責(zé)任基因，其中約30％～50％的FHCM是由MYH7基因突變所致。同時(shí)有研究顯示散發(fā)性肥厚型心肌病(sporadic hypertrophic cardiomyopalthy，S

2、HCM)也存在遺傳學(xué)基礎(chǔ)，而且還可能與FHCM具有相似的發(fā)病機(jī)制。 目的：目前尚無(wú)安徽地區(qū)HCM致病基因分布、基因型等的研究。我們選擇MYH7基因?yàn)楹蜻x基因，對(duì)3個(gè)無(wú)血緣關(guān)系的安徽地區(qū)漢族FHCM患者M(jìn)YH7基因3-26外顯子DNA進(jìn)行直接測(cè)序，了解安徽地區(qū)漢族FHCM的MYH7基因的突變情況，并探討散發(fā)性HCM的可能發(fā)病機(jī)制。 方法：收集安徽地區(qū)3個(gè)無(wú)血緣關(guān)系的漢族HCM共8名患者，分別來(lái)自安徽省東部、西部和北方。3例

3、先證者中，男2例，女1例，年齡21-54歲。散發(fā)病例20例，男12例，女8例，年齡40-70歲，平均年齡50.4歲。用碘化鉀法常規(guī)提取外周靜脈血白細(xì)胞DNA，于-20℃保存。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)MYH7基因3-26號(hào)外顯子含側(cè)翼內(nèi)含子序列的引物…[1]。按雙脫氧末端終止法進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序引物與PCR引物相同。18號(hào)外顯子目的片段大小為443bp，20號(hào)外顯子目的片段大小為331bp。應(yīng)用發(fā)牛突變的18號(hào)、20外顯子同一序列引物擴(kuò)增陽(yáng)性家系中所

4、有成員的DNA目的片段，并測(cè)序。應(yīng)用發(fā)生突變的18號(hào)、20號(hào)外顯子同一序列引物擴(kuò)增20例散發(fā)HCM患者的目的片段并測(cè)序。運(yùn)用chromas程序及Nucl eic Acids Research提供的正常人MYH7基因Exonl8、Exon20序列來(lái)比對(duì)測(cè)序結(jié)果，確定突變位點(diǎn)。 結(jié)果：在3個(gè)FHCM家系8例患者中，有2個(gè)家系2例先證者發(fā)現(xiàn)MYH7基因20號(hào)及18號(hào)外顯子發(fā)生突變，分別為AⅢ-1中20號(hào)外顯子發(fā)生Arg723GIY突變

5、；BI-2中18號(hào)外顯子發(fā)生Arg663His突變。家系C先證者及家系成員未發(fā)現(xiàn)MYH7基因突變。應(yīng)用MYH7基因20號(hào)外顯子、18號(hào)外顯子的引物序列，擴(kuò)增家系A(chǔ)、B各自家系中其他成員(無(wú)論是否患病)DNA及應(yīng)用MYH7基因20號(hào)外顯子引物序列擴(kuò)增散發(fā)性HCM基因突變者家族成員的DNA。家系A(chǔ)中AⅡ1、.AⅢ-2均發(fā)現(xiàn)Arg723Gly突變。所有臨床診斷HCM的患者(A Ⅱ-1、AⅢ-2)均在20號(hào)外顯子的同一位點(diǎn)發(fā)生相同突變，而家系中

6、其他正常人未發(fā)現(xiàn)該突變或攜帶該突變。家系B中健在的其他人員除先證者外，其子及侄也攜帶同樣突變即18號(hào)外顯子發(fā)生Arg663His突變，余未見(jiàn)相同突變。散發(fā)的20例HCM患者中，有1例發(fā)現(xiàn)MYH7基因的20號(hào)外顯子上發(fā)生Ile736Thr突變，未發(fā)現(xiàn)18號(hào)外顯子發(fā)生突變。應(yīng)用MYH7基因20號(hào)外顯子引物序列擴(kuò)增散發(fā)性HCM基因突變者家族成員的DNA并測(cè)序，未見(jiàn)相同突變或攜帶者。 結(jié)論： MYH7基因可能是安徽地區(qū)FHCM的常見(jiàn)突變