甘草酸介導(dǎo)的羥基喜樹堿白蛋白肝癌靶向制劑的制備工藝與體外活性評價.pdf

1、羥基喜樹堿對肝癌的治療效果明顯，作為喜樹堿的衍生物，其抗癌活性是喜樹堿的30倍。但由于其水溶性差、半衰期短、穩(wěn)定性差，影響了羥基喜樹堿在臨床治療中的應(yīng)用。采用載體材料包封與納米制備技術(shù)的方法可以有效的增加藥物的水分散性、穩(wěn)定性，并可保持藥物的長效性。牛血清白蛋白作為一種生物大分子具有其他合成、半合成材料所缺乏的生物兼容性和生物降解性等優(yōu)點，研究表明白蛋白可以有效地阻止內(nèi)酯環(huán)的打開，能夠有效保持羥基喜樹堿的穩(wěn)定性。將載體材料與能和靶組織特

2、異結(jié)合的配體分子偶聯(lián)，可以增加藥物的主動靶向性。肝細(xì)胞表面有甘草酸受體，而肝癌細(xì)胞表面甘草酸受體大量表達(dá)。甘草酸修飾的載體材料包括脂質(zhì)體、白蛋白納米粒等都具有肝靶向性。由于肝臟本身的解毒作用增加了肝癌治療的難度，一般藥物難以到達(dá)病灶，并容易對正常的組織產(chǎn)生毒副作用。
　　本課題研究了一種新型的載有羥基喜樹堿的肝癌靶向給藥系統(tǒng)。采用高壓均質(zhì)乳化法，以甘草酸偶聯(lián)的牛血清白蛋白為載體，制備了載有羥基喜樹堿的具有肝癌靶向性的納米制劑。在制

3、備工藝優(yōu)化設(shè)計中，粒徑大小是選擇最優(yōu)條件的重要標(biāo)準(zhǔn)，主要研究了牛血清白蛋白濃度、水相與有機(jī)相體積比、勻漿轉(zhuǎn)速與勻漿時間、均質(zhì)壓力與均質(zhì)次數(shù)對粒徑大小的影響。對在最優(yōu)條件下制備的納米粒的包封率和載藥量進(jìn)行了檢測，對納米粒的固體形態(tài)進(jìn)行了分析，并對納米粒的溶血試驗、對肝癌細(xì)胞的靶向性和生長抑制作用進(jìn)行了評價。研究成果如下:
　　1.制備出了甘草酸偶聯(lián)的牛血清白蛋白，甘草酸的偶聯(lián)量為98.26μg/mg;利用紅外光譜檢測的辦法，檢測出甘

4、草酸偶聯(lián)牛血清白蛋白中含有甘草酸和牛血清白蛋白的特征峰，并且酰胺鍵的吸收峰增強(qiáng)，說明甘草酸成功地與牛血清白蛋白偶聯(lián)。
　　2.單因素法篩選出制備納米粒的最優(yōu)條件:牛血清白蛋白濃度為1mg/mL，水相與有機(jī)相體積比為25∶1，勻漿條件為5000rpm1min，均質(zhì)壓力為800bar，均質(zhì)次數(shù)為7次。在最優(yōu)條件下制備得到的納米粒的粒徑為157.5nm，電位為-22.51±0.78 mV，包封率和載藥量為93.7％和10.9％。納米粒水

5、分散液在25℃條件下保存16小時粒徑均低于200nm，電位保持在-20.34±4.60 mV到-36.83±2.25 mV的范圍內(nèi)，并且沒有出現(xiàn)沉淀分層的現(xiàn)象。納米粒呈現(xiàn)類球形，分散均勻，粒子間無粘連現(xiàn)象。羥基喜樹堿以無定形態(tài)包封于甘草酸偶聯(lián)的牛血清白蛋白中。納米粒具有良好的緩釋性。
　　3.甘草酸偶聯(lián)牛血清白蛋白不會引起紅細(xì)胞破裂和凝集，是一種安全的載體材料。藥物的靶向性研究是通過對細(xì)胞對藥物的攝取和對細(xì)胞生長抑制來實現(xiàn)的。與未

6、偶聯(lián)甘草酸的樣品相比，經(jīng)過FITC標(biāo)記的GL-BSA-HCPT-NPs孵育的細(xì)胞在激光共聚焦顯微鏡下具有更多的光斑和更大的熒光強(qiáng)度。MTT法用來檢測藥物對細(xì)胞生長的抑制率，GL-BSA-HCPT-NPs對肝癌細(xì)胞的抑制率隨著濃度的增加而增大，并且在相同濃度的條件下，GL-BSA-HCPT-NPs對肝癌細(xì)胞的抑制作用最顯著，并且具有最小的半數(shù)致死劑量濃度。GL-BSA-HCPT-NPs、BSA-HCPT-NPs和HCPT鈉鹽注射劑的IC5