HPV16 E6與p53 Arg72Pro基因多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：通過轉(zhuǎn)染p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)染HPV16 E6基因前后兩種細(xì)胞內(nèi)P53蛋白及其功能相關(guān)蛋白的變化，探討HPV16 E6對p53Arg72Pro不同基因型的P53蛋白及其功能相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，為研究宮頸癌的致癌機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法：構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-His(-)A-HPV16 E6，并用脂質(zhì)體法將pcDNA3.1/myc-His(-)A-HPV16 E6分別轉(zhuǎn)染p5

2、3Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞，通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法對轉(zhuǎn)染HPV16 E6前后的p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞內(nèi)P53、P21、Bax、Ki-67蛋白進(jìn)行檢測。 結(jié)果：(1)經(jīng)過PCR、酶切、回收及連接等分子克隆技術(shù)成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-His(-)A-HPV16 E6。 (2)將真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-His(-)A-HPV16 E6成功轉(zhuǎn)染p53Arg純合型和

3、p53Pro純合型細(xì)胞。 (3)p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞轉(zhuǎn)染空載體后P53Arg和P53Pro蛋白的表達(dá)量分別為0.821±0.019 OD和1.052±0.010 OD與未轉(zhuǎn)染組的0.899±0.040 OD和1.074±0.015 OD相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.185，0.229)：轉(zhuǎn)染E6組P53Arg和P53Pro蛋白的表達(dá)量分別為0.604±0.043 OD和1.006±0.0080D均比未

4、轉(zhuǎn)染組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.000，0.001)。而且P53Arg蛋白降低趨勢比P53Pro蛋白更明顯。 (4)P21蛋白在p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞中表達(dá)量均較低甚至不表達(dá)；HPV16 E6作用后，P21蛋白的表達(dá)量也沒有明顯變化。 (5)p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞轉(zhuǎn)染空載體后，Ki-67蛋白陽性率分別為81.48％和81.14％，與未轉(zhuǎn)染組的Ki-67蛋白陽性率80.26

5、％和79.66％相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.624，0.462)；轉(zhuǎn)染E6組p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞內(nèi)Ki-67表達(dá)均增高，分別為86.73％和87.89％，與未轉(zhuǎn)染組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.047，0.016)。p53Pro純合型細(xì)胞內(nèi)Ki-67蛋白增高趨勢比p53Arg純合型細(xì)胞明顯。 (6)p53Arg純合型和p53Pro純合型細(xì)胞轉(zhuǎn)染空載體后，Bax蛋白的表達(dá)量分別為0.292±0.

6、004 OD和0.412±0.031 OD，與未轉(zhuǎn)染組的0.297±0.013 OD和0.416±0。025OD相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；轉(zhuǎn)染E6組p53Arg純合型細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白的表達(dá)量為0.296±0.009 OD比未轉(zhuǎn)染組的0.297±0.013 OD僅輕微降低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值為0.958)；p53Pro純合型細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白的表達(dá)量為0.332±0.013 OD，與未轉(zhuǎn)染組相比降低明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值為0.023)

7、。 結(jié)論：(1)成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-His(-)A-HPV16 E6。 (2)將真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-His(-) A-HPV16 E6轉(zhuǎn)染p53Arg純合型和p53 Pro純合型細(xì)胞后，在兩株細(xì)胞內(nèi)P53蛋白表達(dá)均降低，提示P53Arg蛋白和P53Pro蛋白可能均被HPV16 E6蛋白降解，其中P53Arg蛋白降解作用更明顯。 (3)在兩株細(xì)胞內(nèi)P53Arg蛋白和P53