復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌與BRCP和MRP1相關(guān)性的研究.pdf

1、乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤，目前，治療乳腺癌的手段主要有手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌治療和免疫治療，這些綜合治療在90％的原發(fā)乳腺癌和50％的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌中顯著地提高了乳腺癌患者的生存率。然而，調(diào)查顯示Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期乳腺癌的5年復(fù)發(fā)風(fēng)險分別為7％、11％和13％，30％的乳腺癌最終會復(fù)發(fā)。腫瘤的多藥耐藥是化療失敗的主要原因，其中，多藥耐藥相關(guān)蛋白(multidrug resistance proteinl，MRP1)和乳腺癌耐藥

2、蛋白(breast cancer resistance protein，BCRP)是ATP依賴性(adenosine triphosphate—binding cassette，ABC)跨膜轉(zhuǎn)運蛋白超家族的主要成員，具有藥物排出功能，進而降低細胞內(nèi)的細胞毒性藥物濃度，引起腫瘤細胞的耐藥。相關(guān)研究表明蒽環(huán)類藥物是BCRP和MRP1的底物，而蒽環(huán)類藥物恰恰是乳腺癌化療的主要藥物，故BCRP和MRP1與蒽環(huán)類藥物的關(guān)系的研究有重要的臨床意義。

3、 目前鮮有關(guān)于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌與耐藥蛋白的關(guān)系的研究，且BCRP和MRP1在乳腺癌中的表達相關(guān)性的研究報道少見，本研究采用免疫組織化學(xué)SABC法分別檢測局部復(fù)發(fā)乳腺癌、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌和無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌中BCRP和MRP1的表達情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系，旨在探求代謝與腫瘤生物學(xué)特性的關(guān)系以及與腫瘤MDR的關(guān)系，為腫瘤的預(yù)后評估、指導(dǎo)臨床合理用藥、尋求腫瘤治療的新方法提供理論依據(jù)。 一、實驗方法: (一)

4、病例和標本 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院普外科2005年1月—2006年12月共手術(shù)治療1166例乳腺癌。我們從中選擇42例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的腫瘤標本，經(jīng)隨訪證實已發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以臨床評估，胸片，彩超，頭CT或MRI和骨掃描為診斷標準，以三年為時限；并選擇同時期的84例為無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，作為對照組。另外15例標本為局部復(fù)發(fā)乳腺癌，經(jīng)二次手術(shù)切除病理證實與原發(fā)灶病理類型相同，為復(fù)發(fā)灶。患者術(shù)前未經(jīng)過任何治療，經(jīng)病理檢查確診為乳腺導(dǎo)管浸潤

5、癌，術(shù)后接受至少4個周期的蒽環(huán)類方案化療。 (二)試劑 鼠抗人BCRP單克隆抗體(工作濃度為1:100)、鼠抗人MRP1單克隆抗體(工作濃度為1:100)及山羊抗鼠SABC試劑盒均購自美國SANTA Cruze生物技術(shù)有限公司。 (三)方法 采用免疫組化SABC法，按照SABC檢測試劑盒說明書所示步驟進行，切片經(jīng)檸檬酸緩沖液(PH=6.0)高壓熱修復(fù)預(yù)處理。 (四)結(jié)果判定 觀察BCRP和

6、MRP1時，均以鏡下觀察到細胞核藍色，胞質(zhì)棕黃色染色為陽性。每張切片選擇5個視野，用40倍物鏡觀察采集圖像。對于每張圖像，我們應(yīng)用MetaMorph/Evolution MP5.0/BX51圖像采集及分析軟件，分析測定其陽性區(qū)域的光密度值(Optical Dens，OD)及積分光密度值(Integral Optical Dens，IOD)。結(jié)果均記錄在表格中，準備統(tǒng)計學(xué)分析。 (五)統(tǒng)計分析方法 采用SPSS16.0軟件

7、包，乳腺癌中局部復(fù)發(fā)組、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組、無復(fù)發(fā)組的BCRP與MRP1的比較用兩獨立樣本非參數(shù)檢驗。兩數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性以及BCRP和MRP1與病理特征的關(guān)系用Spearman秩和相關(guān)檢驗。所有統(tǒng)計分析過程均采用p<0.05為顯著性檢驗水準，所有檢驗和P值均為雙側(cè)。 二、實驗結(jié)果: (一)BCRP和MRP1在乳腺癌組織中的表達 BCRP和MRP1在126例原發(fā)性乳腺癌組織中均有一定程度的表達，BCRP和MRP1的效應(yīng)產(chǎn)

8、物主要定位于胞漿和胞膜，呈棕黃色顆粒彌漫或散在分布。BCRP的陽性表達IOD值為44.07±25.48，MRP1的陽性表達IOD值為14.93±11.97。另外，少數(shù)癌旁正常乳腺組織中也可見上述蛋白表達，但著色淺，且分布不均勻。 (二)局部復(fù)發(fā)組、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組及無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組與BCRP和MRP1表達 局部復(fù)發(fā)組、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組及無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組的BCRP表達存在顯著性差異，BCRP在局部復(fù)發(fā)組中的表達顯著高于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組(p=0.00

9、1)，在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組中的表達明顯高于無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組(p=0.04)，MRP1在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組的表達明顯高于無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組(p=0.003)，BCRP和MRP1無顯著相關(guān)性。 (三)復(fù)發(fā)灶與原發(fā)灶的BCRP和MRP1的關(guān)系 我們選出10例乳腺癌局部復(fù)發(fā)病人的復(fù)發(fā)前后兩次標本進行比較，分布命名為原發(fā)灶組和復(fù)發(fā)灶組，分別比較兩組間BCRP和MRP1的表達情況。結(jié)果提示BCRP在復(fù)發(fā)灶組的表達明顯高于原發(fā)灶組的表達(p=0.01)，MRP

10、1在兩組的表達無顯著性差異(p=0.85)。 (四)BCRP和MRP1與臨床病理特征的關(guān)系 BCRP與ER(r=0.389，p<0.01)，PR(r=0.215，p<0.05)，HER2(r=0.339，p<0.05)呈正相關(guān)，有統(tǒng)計學(xué)意義，與年齡，絕經(jīng)情況，腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。MRP1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.207，p<0.05)呈正相關(guān)，而與其他各項病理特征均無相關(guān)性。 結(jié)論: 1、BCRP