紅腰子豆植物血球凝集素的純化、鑒定與藥效研究初探.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文紅腰子豆植物血球凝集素的純化、鑒定與藥效研究初探姓名：丘力功申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：羅進(jìn)賢2006032990mmol／LNaOl緩沖液洗脫。隨后對純化的PHA有效組分進(jìn)行鑒定。以還原性SDS—PAGE確定PIIA的有效綢分分子量為347KD。N端測序結(jié)果經(jīng)分析表明I，|_IA有效組分的N端序列與數(shù)據(jù)庫中的PA—L序列一致。而SephacrylS200分子篩層析分析結(jié)果證明在gOmmol

2、／LNaCl的溶液濃度下，PHA有效組分以二聚體形式存在。硫酸葸酮法榆測結(jié)果確定阡IA有效組分含糖百分比為128％，將H盤質(zhì)量指紋潛結(jié)果與公咖的PHAI糖肽序列比對，發(fā)現(xiàn)PItA有效組分含有三個不同的糖基序列。以淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化活性為指標(biāo)檢測了純化的l，HA在不同條件下的穩(wěn)定性，細(xì)胞活性檢測結(jié)果表明PItA有效組分的水劑和凍1：劑均適合紅腰子豆素長期保存，冷藏、冷凍條件下均十分穩(wěn)定。在純化和箍定的基礎(chǔ)上，將純化的PHA有效組分命名為紅腰子豆

3、素。隨后進(jìn)行了紅腰子豆素對再生障礙性貧血小鼠的藥效研究。再生障礙性貧血小鼠腹腔注射紅腰子豆素，005rag／只／天，連續(xù)注射15天，檢測結(jié)果表明紅腰子豆素顯著增加r自身免疫抑制類型的再生障礙件貧血4、鼠的血紅蚩白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和骨髓有核絀胞的數(shù)量。在化療致骨髓抑制小鼠的藥效研究中，分高、中、低■個劑量組(oimg、005mg、0025mg)，尾靜脈注射紅腰子豆素，每三日注射一次，共注射三次。于第三次注射后第2天檢測小鼠外周血指

4、標(biāo)，第6天檢測骨髓有核細(xì)胞數(shù)。榆測結(jié)果表明紅腰子豆素同樣能增加化療致骨髓抑制模型小鼠的外周血細(xì)胞組分和骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量。為分析紅腰子豆素的免疫原性，按高、中、低三個劑量組(0lmg、002mg、0004mg)對小鼠進(jìn)彳j‘免疫，兩周后加強灃射次，第14天對免疫小鼠及紅腰子豆素注劓的再q二障礙性貧血小鼠和骨髓抑制小鼠的血清進(jìn)行抗體滴度檢測。檢測結(jié)果揭不紅腰子豆素能通過腹腔／靜脈途徑能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，目抗體效價與抗原劑量呈依賴關(guān)系。但再生障