海洋芽孢桿菌B-9987的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的研究及次級代謝相關(guān)調(diào)控基因bmbll02的初步功能研究.pdf

1、海洋芽孢桿菌B-9987是從我國渤海潮間帶植物鹽地堿篷的根中分離得到的。前期研究結(jié)果表明，其發(fā)酵液對于多種植物病原真菌(如稻瘟霉和茄交鏈孢)都具有較強的抑制作用，暗示了B-9987具有產(chǎn)生豐富次級代謝產(chǎn)物的能力，為了從分子水平上揭示B-9987其產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的能力并對其生物合成的分子調(diào)控機理進行研究，本課題著重于以下兩部分的研究：
　　 第一部分是海洋芽孢桿菌B-9987遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的構(gòu)建。海洋芽孢桿菌B-9987為天然分離

2、菌株，為了在其中進行遺傳操作，首先要建立一種有效的方法能夠使得外源DNA導入B-9987之中，以自主方式復制，或通過同源重組或位點特異性重組整合到染色體上隨宿主一起復制。海洋芽孢桿菌B-9987的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)尚未有人研究。本論文主要對B-9987的原生質(zhì)體形成、再生及轉(zhuǎn)化方法進行了較為系統(tǒng)的研究，初步建立了B-9987的原生質(zhì)體-電擊轉(zhuǎn)化方法，以pHT3101為質(zhì)粒DNA進行轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化頻率約達到3×104CFU/μgDNA。
　

3、　 第二部分是次級代謝調(diào)控基因bmb1102的功能研究。通過生物信息學分析和比較基因組學分析發(fā)現(xiàn)，B-9987基因組中存在一個bmb1102基因，大小為585個堿基，其編碼產(chǎn)物與TetR-N家族的調(diào)控蛋白具有高度的同源性。在靠近Bmb1102的氨基端有一個典型的HTH(helix-turn-helix)超家族DNA結(jié)合區(qū)，該家族調(diào)控蛋白往往通過與靶基因結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平上參與調(diào)控多藥efflux pumps或抗生素生物合成途徑。因此，我