海洋曲霉屬真菌次級代謝產(chǎn)物生物合成基因簇的基因組挖掘與遺傳轉化體系構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、海洋微生物來源的天然產(chǎn)物因其獨特的結構與生物學活性而備受關注，特別是有研究證實海洋動植物體內的微生物是其活性化合物的真正生產(chǎn)者。海蟑螂(Ligia oceanic)是中國南方沿海漁民治療跌打損傷常用的藥用動物，但目前對海蟑螂及其微生物的次級代謝產(chǎn)物（Secondary Metabolites，SMs）的研究較少，難以確認其藥用活性成分。
　　本研究以海蟑螂腸道內海洋真菌Z5為研究對象，經(jīng)rDNA序列鑒定為曲霉屬菌株(Aspergi

2、llus sp.)。應用二代高通量測序技術對該菌株進行全基因組測序分析及antiSMASH基因簇分析，結果顯示Z5菌株基因組大小為33.8Mbp，系統(tǒng)進化處于A.versicolor分支，共含有89個SMs生合成基因簇，結合One-Strain-Many-Compounds(OSMAC)結果說明:該菌具有合成多種SMs的潛能;全基因組挖掘的SMs基因簇數(shù)量遠超OSMAC分析的化合物數(shù)量，多數(shù)基因簇在現(xiàn)有培養(yǎng)條件下為沉默狀態(tài)，如激活這些沉

3、默基因簇的表達，極可能獲得新型活性化合物。為開展該菌株的生物合成研究而獲得新型化合物，本研究構建了Z5的遺傳轉化系統(tǒng)，探索優(yōu)化原生質體制備純化方法，確定可通過β-巰基乙醇預處理及蔗糖分層純化法獲得再生率為94％的高質量原生質體，并應用Double-Joint PCR替代傳統(tǒng)酶切連接法構建基因盒，最終通過PEG/CaCl2轉化，獲得Z5的營養(yǎng)缺陷型菌株。
　　本研究為海洋真菌新型天然產(chǎn)物的獲得提供重要來源，為開發(fā)應用該類真菌天然產(chǎn)物

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