長(zhǎng)葉紅砂WRKY轉(zhuǎn)錄因子的克隆及特性分析.pdf

1、長(zhǎng)葉紅砂（Reaumuriatrigyna）是內(nèi)蒙古東阿拉善-西鄂爾多斯地區(qū)特有的泌鹽鹽生小灌木，具有獨(dú)特的適應(yīng)鹽漬荒漠環(huán)境的形態(tài)特征和生理調(diào)控機(jī)制，是研究植物耐鹽機(jī)理、獲得耐鹽優(yōu)異基因的良好材料。WRKY轉(zhuǎn)錄因子作為一個(gè)重要的響應(yīng)非生物脅迫的轉(zhuǎn)錄因子家族，在植物抵抗逆境脅迫中發(fā)揮著十分重要的作用。本文從長(zhǎng)葉紅砂轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選WRKY轉(zhuǎn)錄因子成員，分析長(zhǎng)葉紅砂中WRKY轉(zhuǎn)錄因子在人工逆境脅迫下的表達(dá)情況，并對(duì)2個(gè)長(zhǎng)葉紅砂W

2、RKY轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了克隆和功能鑒定。研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)長(zhǎng)葉紅砂轉(zhuǎn)錄高通量測(cè)序結(jié)果進(jìn)行篩選，得到了67條長(zhǎng)葉紅砂WRKY轉(zhuǎn)錄因子的Unigene片段，比對(duì)結(jié)果顯示，其中23條與數(shù)據(jù)庫(kù)中毛白楊WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族成員具有相似性。
　　2.從67條長(zhǎng)葉紅砂WRKY轉(zhuǎn)錄因子的Unigene片段中選出10條基因，對(duì)其在人工模擬的鹽、冷、干旱和ABA脅迫下的表達(dá)情況進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)10條基因都受鹽脅迫和冷脅迫誘導(dǎo)表達(dá)，而分別有8條

3、和7條基因受干旱和ABA誘導(dǎo)表達(dá)。
　　3.利用RACE技術(shù)，克隆得到了2條長(zhǎng)葉紅砂WRKY基因，分別命名為RtWRKY1和RtWRKY23，序列分析顯示它們分屬于第Ⅰ類(lèi)和第Ⅱ類(lèi)WRKY轉(zhuǎn)錄因子。RtWRKY1與擬南芥WRKY1的相似度為69％;RtWRKY23與擬南芥WRKY23的相似度為40％。聚類(lèi)分析表明長(zhǎng)葉紅砂RtWRKY1與擬南芥、油菜、毛白楊等物種的WRKY基因同源性較高，而RtWRKY23與馬鈴薯、辣椒、大豆的WRK

4、Y基因同源性較高。
　　4.長(zhǎng)葉紅砂RtWRKY1和RtWRKY23基因表達(dá)具有組織特異性，RtWRKY1只在莖中表達(dá)，而RtWRKY23不但在莖中表達(dá)，在根和葉中也有微量表達(dá)。
　　5.對(duì)RtWRKY1和RtWRKY23基因產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位研究發(fā)現(xiàn)，這2條基因編碼的蛋白均定位于細(xì)胞核，在細(xì)胞核中通過(guò)與靶基因的特異性結(jié)合來(lái)調(diào)控下游靶基因的表達(dá)。
　　6.構(gòu)建了真核表達(dá)載體pMETα-RtWRKY，為在酵母中的異源表達(dá)及