玉米WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及耐逆性研究.pdf

1、WRKY轉(zhuǎn)錄因子主要存在于植物中，其家族成員廣泛參與植物生長(zhǎng)發(fā)育、代謝以及對(duì)生物和非生物脅迫的反應(yīng)。本研究利用逆境因子Zm WRKY33,Zm WRKY57和Zm WRKY62基因進(jìn)行脅迫誘導(dǎo)，在此基礎(chǔ)上從玉米中克隆這三個(gè)WRKY基因,并對(duì)其耐逆性功能進(jìn)行了初步的研究。結(jié)果如下：
　　 1.利用逆境因子干旱、高鹽和低溫對(duì)ZmWRKY33，ZmWRKY57和ZmWRKY62三個(gè)基因進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)分析，結(jié)果顯示三個(gè)基因均受逆境因子干旱

2、、高鹽和低溫的誘導(dǎo)表達(dá)。
　　 2.克隆了三個(gè)玉米WRKY基因，Zm WRKY33，Zm WRKY57和Zm WRKY62。它們分別編碼307個(gè)氨基酸殘基、311個(gè)氨基酸殘基和306個(gè)氨基酸殘基，都有1個(gè)高度保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，鋅指結(jié)構(gòu)域都為典型的C2H2。
　　 3.構(gòu)建了過(guò)表達(dá)載體（p-Zm WRKY33）,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化晚晴粳稻愈傷，獲得20 株T0代過(guò)表達(dá)株系。T1代過(guò)表達(dá)株系的耐逆性功能研究表明，Z

3、m WRKY33具有增強(qiáng)水稻耐干旱、高鹽和低溫的耐受性。
　　 4.通過(guò)構(gòu)建融合表達(dá)載體PRTL-2-Zm WRKY33-mGFP，PRTL2-Zm WRKY57-mGFP和PRTL2-Zm WRKY62-mGFP,采用基因槍法轟擊洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示Zm WRKY33,Zm WRKY57和Zm WRKY62與GFP載體的融合蛋白都定位于細(xì)胞核中，說(shuō)明Zm WRKY33，Zm WRKY57和Zm WRKY62