成骨不全四家系基因突變檢測(cè)及基因型表型關(guān)系分析.pdf

1、成骨不全(Osteogenesis Imperfecta，OI)是一種全身性遺傳性結(jié)締組織疾病，根據(jù)其臨床表現(xiàn)及體征的不同，目前分為7種類型，研究表明90％以上的OI患者具有Ⅰ型膠原基因(COL1A1/COL1A2基因)的改變，其中尤以COL1A1基因的改變?yōu)橹?；OI的基因型表型關(guān)系目前還不十分明確，但分子遺傳學(xué)研究表明，OI臨床表現(xiàn)與突變基因具有一定的相關(guān)性，不同人種及家系的基因突變各有特點(diǎn)，并常常具有私有性突變。OI基因水平的研究目

2、前已成為國(guó)內(nèi)外研究的一個(gè)熱點(diǎn)，迄今國(guó)外已報(bào)道了千余種導(dǎo)致OI表型的Ⅰ型膠原基因的突變，但在我國(guó)OI的研究仍主要停留在臨床個(gè)案報(bào)道及影像學(xué)報(bào)告的階段，基因突變水平的研究還比較少見(jiàn)。
　　 目的
　　 本研究選取國(guó)內(nèi)4個(gè)OI先證者家系，通過(guò)臨床查體、病史問(wèn)詢、家系調(diào)查及基因突變的檢測(cè)，明確各家系中患病個(gè)體的臨床診斷分型，尋找基因突變位點(diǎn)，明確遺傳方式，并探討中國(guó)人群OI基因型與表型的關(guān)系，以豐富中國(guó)人群在這方面的資料，為該病

3、的診斷預(yù)防及遺傳咨詢工作奠定一定的基礎(chǔ)，并為將來(lái)可能的基因治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 本研究選取2008年6月至2009年6月就診于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診的河南省內(nèi)的四個(gè)OI先證者，分別對(duì)其家系患病成員及部分健康成員進(jìn)行臨床體格檢查、病史及家系調(diào)查，以收集臨床資料，繪制不同家系的遺傳圖譜，確定各家系的遺傳方式，根據(jù)sillence提出的經(jīng)典分型標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各家系中患病個(gè)體進(jìn)行臨床診斷分型；然后經(jīng)患者本人及家屬知情

4、同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意批準(zhǔn)，抽取家系中患病成員及部分健康成員的外周血液標(biāo)本，提取血液標(biāo)本的白細(xì)胞基因組DNA，應(yīng)用PCR擴(kuò)增的方法對(duì)四個(gè)先證者的COL1A1/COL1A2上所有的啟動(dòng)子，外顯子及外顯子-內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行基因擴(kuò)增及基因突變檢測(cè)，應(yīng)用DNA直接測(cè)序法對(duì)4例先證者的Ⅰ型膠原基因(COL1A1/COL1A2基因)片段進(jìn)行測(cè)序，然后應(yīng)用生物信息學(xué)軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果與Genbank標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比分析，以尋找基因突變的位點(diǎn)及形式，最

5、后根據(jù)四個(gè)先證者的基因檢測(cè)結(jié)果，分別對(duì)各家系其他成員的血液標(biāo)本進(jìn)行COL1A1/COL1A2基因的突變檢測(cè)及測(cè)序，并應(yīng)用生物信息學(xué)軟件加以分析。
　　 結(jié)果：
　　 (1)臨床診斷分型結(jié)果：先證者一診斷為Ⅳ型OI，先證者一母親診斷為Ⅰ型OI；先證者二診斷為Ⅰ型OI；先證者三及其父親，姑姑均診斷為Ⅰ型OI；先證者四及其母親均為Ⅰ型OI。
　　 (2)基因檢測(cè)及測(cè)序結(jié)果：在先證者一及其家系患病個(gè)體中檢測(cè)到COL1A1

6、基因上第36外顯子c.2473位點(diǎn)G>A的突變，先證者二在COL1A1基因上第26內(nèi)含子剪切位點(diǎn)處檢測(cè)到c.1821+1位點(diǎn)G>A的突變，先證者四及其家系患病個(gè)體中檢測(cè)到COL1A1基因上第9個(gè)內(nèi)含子剪切位點(diǎn)處c.697-2位點(diǎn)C>T的突變，先證者三及四個(gè)家系中所有非患病成員個(gè)體均未檢測(cè)到COL1A1/COL1A2基因上的突變。
　　 結(jié)論：
　　 (1)COL1A1基因的改變可以導(dǎo)致成骨不全，也是引起中國(guó)人群成骨不全的