基因型對油菜遺傳轉化效率的影響和幾個轉基因油菜家系的表型分析.pdf

1、分類 號華 中農業(yè)大學碩士學位 論文基 因型對油菜遺傳轉化效率 的影 響和 幾個轉 基 因油 菜 家 系 的表型分 析E ff e etsofgen oty P eso ntran sfo rm ationeff i cien cyan dth eP h en oty P i can al y sisoftran sgen icraP eseedlin es研 究 生 : 夏 蜻授 授 授 教 教 教 指 導 教 師 : 周永 明指 導

2、 小 組 : 周永 明李 再 云范 楚川 副教授專 業(yè) : 作 物 遺傳育種獲 得 學位 名稱 : 農 學碩 士研 究方 向: 油菜遺 傳 育 種獲 得學位 時 間 : 201 0 年 6 月華 中農業(yè) 大 學植物 科 學 與 技 術 學 院二 O 一 O 年 六 月華 中農業(yè) 大 學 2010 屆碩 士研 究生學位 論文2. 1 材 料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … 202.1，

4、1 植 物材 料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202.1. 2 轉 化載 體 . . .

5、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……‘ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202. 1. 3 實驗 所用 試劑 . . . . . . . . . . . . .

6、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . … …202 .1. 4 引物 . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

7、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……卜 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212 . 2 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … 212 . 2.1 分子 生物 學基本 操 作 方 法 . . . . . . . . . . . . .

9、. . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212. 2.1.1E dw aulS 法 提 取 植物 基 因組 D N A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

10、. . . ……212. 2 .1 . 2C T A B 小樣 法 提 取 油 菜 基 因組大 樣 法提 取 油 菜基 因組D N A........................................… … 2 12. 2 .1 . 3C T A B D N A ........................................… … 2 22. 2.1. 4T R lpure 法提 取 油菜 RN A .

11、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……222. 2.1. 5R T-P C R 反 應 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

12、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……232. 2. 2 油菜 的遺 傳轉 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……232. 2. 2.1 播 種 和 無 菌 苗 的獲 得 . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……242. 2. 2. 2 農 桿菌 的活化 . . .

14、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……242. 2. 2. 3 外 植 體 的制 備 及 侵 染 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……242. 2. 2. 4 共 培 養(yǎng) 處 理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……252. 2. 2. 5 誘 導 愈傷 培 養(yǎng) 基 上 外 植 體 的培養(yǎng) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……252. 2. 2. 6 分化 培 養(yǎng) 基 上 外 植 體 的分 化 . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……252 . 2. 2. 7 生根培 養(yǎng) 基 上 綠 芽 的生根 培 養(yǎng) . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . …， . . . . . . . . . . . . . . . . . ……252 . 2.

18、 3 轉 基 因植 株 的分 子檢 測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . ……252. 2. 3.1 轉 化 再 生 油 菜 的 P C R 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、 . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……252. 2. 3. 2 轉基 因植 株 的基 因表 達 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……262.

20、 2. 3. 3 轉基 因油菜 的 Southem 一 Bl ot 分 子 雜 交 . .. . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . ……262. 2. 4 油菜 種 子 中脂 肪 酸含 量 的分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . .

21、. . . . . . . . . . . . . . . . ……273. 結 果 與 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， . . . . . . . . . . .

22、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……293.1 不 同基 因型 轉 化 效 率 的 比較 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

23、 . . . . . . . … …293 . 2FA D ZR 載 體 的 油 菜 遺 傳 轉 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …31