綜合征型耳聾臨床表型特征分析及相關(guān)基因突變研究.pdf

1、近十幾年遺傳性耳聾相關(guān)基因的定位克隆工作取得了令人矚目的成就，自1990年Alport綜合征COL4A5基因被克隆以來，已定位的綜合征型耳聾基因位點30個，已克隆的綜合征型耳聾核基因29個，線粒體基因4個。這些基因編碼的蛋白質(zhì)包括離子通道蛋白、膜蛋白、轉(zhuǎn)錄因子和結(jié)構(gòu)蛋白等。 Usher綜合征和Waardenburg綜合征作為臨床上比較常見的兩種綜合征型耳聾，部分相關(guān)致病基因已經(jīng)被定位克隆。歐美人群大約400多個Usher綜合征家

2、系及80多個Waardenburg綜合征家系的分子病因已被揭示，國內(nèi)Usher綜合征和Waardenburg綜合征的研究僅見個別臨床病例報道，中國人群兩種綜合征的分子遺傳背景還未見報道。本研究利用解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉研究所建立的聾病資源收集系統(tǒng)，收集Waardenburg綜合征和Usher綜合征病例，并對這些病例的臨床特征進(jìn)行分析，選取相關(guān)基因進(jìn)行突變研究，具體分為以下兩個部分： 第一部分Waardenburg綜合征病例資源的收

3、集及相關(guān)基因突變研究Waardenburg綜合征是一種較常見的綜合征型遺傳性耳聾，臨床主要表現(xiàn)為感音神經(jīng)性耳聾、皮膚、毛發(fā)、眼睛色素分布異常等癥狀。其主要遺傳方式為常染色體顯性遺傳伴有不完全外顯。共分為4個亞型，分別是Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型，臨床上以Ⅰ型和Ⅱ型最多見。Waardenburg綜合征具有高度的遺傳異質(zhì)性，目前有7個相關(guān)致病基因被定位克隆，其中以PAX3基因和MITF基因突變與Waardenburg綜合征發(fā)病關(guān)系最為密切。為研

4、究中國人群Waardenburg綜合征的分子遺傳背景，本研究首先利用解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉研究所建立的聾病資源收集系統(tǒng)，對該綜合征進(jìn)行收集。自2004年9月～2005年12月止，我們在全國10個不同的省份(自治區(qū))共收集到35例Waardenburg綜合征病例，其中Waardenburg綜合征Ⅱ型病例28例，Waardenburg綜合征Ⅰ型病例7例。Waardenburg綜合征臨床表型特征變異較大，不同家系之間以及同一家系內(nèi)部不同患者之間

5、均有很大變異。因此本研究針對不同亞型對Waardenburg綜合征病例的臨床表型特征進(jìn)行分析，同時對28例Waardenburg綜合征Ⅱ型病例進(jìn)行MITF基因的突變分析，共發(fā)現(xiàn)6種MITF基因突變位點，其中5種為本研究首次報道，分別是328C→T/(R110X)、763C→T/(R255X)、20A→G/(Y7C)、649A→G/(R217G)、332C→T/(A111V)突變；證實一種見于美國Tietz綜合征(白化病-耳聾綜合征)的突

6、變647-649delGAA/del(R217)。對7例Waardenburg綜合征Ⅰ型病例進(jìn)行PAX3基因的突變分析，發(fā)現(xiàn)5種PAX3基因核苷酸改變，其中626-627delCT/(S209X)突變?yōu)楸狙芯渴状伟l(fā)現(xiàn)。667C→T/(R223x)和812G→A/(R271H)突變?yōu)槭状卧谥袊巳鹤C實。另外本研究檢測到兩種發(fā)生在PAX3基因內(nèi)含子序列中的核苷酸改變，分別是IVS2+74T→C和IVS6+57C→T，它們與剪切位點相隔甚遠(yuǎn)，

7、可能的機制尚待進(jìn)一步研究。本研究首次在中國人群進(jìn)行MITF基因和PAX3基因突變分析，11種核苷酸改變的發(fā)現(xiàn)豐富了人類PAX3基因和MITF基因突變數(shù)據(jù)庫。通過本研究建立了一套實驗室常規(guī)進(jìn)行PAX3基因和MITF基因突變分析的檢測方法，為Waardenburg綜合征的分子診斷、遺傳咨詢的開展奠定了堅實的基礎(chǔ)。 第二部分Usher綜合征Ⅱ型家系臨床表型特征及USH24基因突變分析 Usher綜合征又稱遺傳性耳聾-視網(wǎng)膜色素

8、變性綜合征，臨床上以先天性感音神經(jīng)性聾、漸進(jìn)性視網(wǎng)膜色素變性而致的視野縮小、視力障礙為主要表現(xiàn)的一種遺傳性疾病，其遺傳方式為常染色體隱性遺傳。臨床上依據(jù)聽力損失的程度、視力或視野受損發(fā)病的時間及程度，將其分為3型，分別是Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型，其中以Ⅱ型最多見。Usher綜合征具有高度的遺傳異質(zhì)性，有8個相關(guān)基因被定位克隆。為此依據(jù)不同的分子病理機制對其進(jìn)行更為細(xì)致的遺傳學(xué)分類，其中Ⅱ型分為3個亞型，分別命名為A、B、C型。本研究發(fā)現(xiàn)一個耳聾

9、-視網(wǎng)膜色素變性的家系，通過系譜分析、耳聾發(fā)病時間及程度、夜盲發(fā)病時間及前庭功能狀況將其診斷為Usher綜合征Ⅱ型，選取USH2A基因進(jìn)行全基因突變分析，本研究未發(fā)現(xiàn)與家系疾病表型共分離的USH2A基因突變位點，僅檢測到9種單核苷酸多態(tài)改變，其中573A→G/(V191V)、1276A→T/(N426Y)、IVS19-44G→A、IVS19-66A→C為本研究首次報道，504A→G/(T168T)、879T→G/(L293L)、IVS1