WD臨床表現(xiàn)-臨床分型關系，基因型-表型關系和基因突變類型-青霉胺療效關系的研究.pdf

1、肝豆狀核變性(Hepatolenticular degeneration，HLD)是一種難治性的常染色體隱性遺傳病，該病伴隨典型的銅離子代謝障礙。
　　通過探討，對研究肝豆狀核變性的發(fā)病機制、疾病進展、臨床治療以及預后轉(zhuǎn)歸有著及其重要的參考意義。近年來，關于肝豆狀核變性基因突變和臨床表型關系的研究國內(nèi)外學者已進行較多研究，但因肝豆狀核變性患者基因型多樣，臨床表現(xiàn)復雜多變，并且不同地域不同種族其臨床表現(xiàn)和基因突變類型均存在較大差異，

2、因此目前尚無統(tǒng)一認識。
　　目前肝豆狀核變性的治療仍以藥物治療為主，青霉胺作為銅離子螯合劑，具有療效肯定、藥源充足、廉價、使用方便等優(yōu)點，因此是我國目前治療肝豆狀核變性的主要藥物之一。根據(jù)基因突變的研究結(jié)果，觀察不同基因突變類型患者使用青霉胺治療的效果，可以為肝豆狀核變性個體化治療奠定基礎。
　　目的：
　　1.根據(jù)肝豆狀核變性患者的臨床特點，按照臨床分型進行回顧性分析，提高對肝豆狀核變性的診斷意識，發(fā)現(xiàn)疾病進展的規(guī)律

3、，對不同臨床癥狀的肝豆狀核變性患者盡早明確診斷。
　　2.發(fā)現(xiàn)我國肝豆狀核變性患者高頻突變位點和新的基因突變位點，為建立有效地基因篩查及早期診斷提供參考依據(jù)。
　　3.研究我國肝豆狀核變性患者主要基因突變位點的基因型與臨床表型的相關性，探討肝豆狀核變性的發(fā)病機制，為肝豆狀核變性的預防、診斷、治療提供參。
　　4.探討肝豆狀核變性不同基因突變類型對應用青霉胺治療的差別，分析臨床治療效果是否與基因突變類型有相關性，為肝豆狀

4、核變性個體化治療提供指導。
　　方法：
　　本課題共包括四部分內(nèi)容:
　　第一章：肝豆狀核變性513例流行病學研究
　　收集我院確診為肝豆狀核變性患者的基本臨床資料，并收集整理統(tǒng)計相關檢驗、檢查結(jié)果。根據(jù)臨床表現(xiàn)將肝豆狀核變性進行臨床分型，將肝豆狀核變性分為肝型、腦型、其它類型、混合型。按照臨床分型對該病的首發(fā)癥狀、性別、血清銅、血清銅藍蛋白、24h尿銅、血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanIne amInotransfera

5、se，ALT)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)、Ⅲ型前膠原(precollagen typeⅢ，PCⅢ)、層黏蛋白(laminin，LN)、Ⅳ型膠原(collagenⅣ，CⅣ)的變化水平進行探討。
　　第二章：WD基因突變位點的檢測與分析
　　收集我院2013年5月-2015年5月神經(jīng)內(nèi)科就診治療的患者52例，均確診為肝豆狀核變性，選取50例無親緣關系的健康個體作為對照者，經(jīng)檢驗24小時尿銅量、肝功能、血清

6、銅藍蛋白濃度、K-F環(huán)檢查、腹部彩超等無異常，臨床排除肝豆狀核變性以及其他重大疾病。提取基因組DNA并進行P CR擴增，將PCR產(chǎn)物經(jīng)Qiaquick Spin柱（德國Qiagen公司）純化后，進行雙向測序，對ATP7B基因的21個外顯子及其啟動子序列進行檢查，查找所檢樣品中ATP7B基因中所存在的多態(tài)性位點。
　　第三章：肝豆狀核變性患者基因型和臨床表型關系的研究
　　選取基因測序的52例WD患者為研究對象，收集上述患者的

7、臨床資料，以該研究中突變頻率較高的第8外顯子Arg778Leu突變、第13號外顯子上Pro992Leu突變及突變類型作為基因型，將臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍蛋白、24小時尿銅、ALT、肝纖維化血清學結(jié)果作為臨床表型進行比較。探討中國人WD患者高頻基因突變位點的基因型與臨床表型的相關性。
　　第四章：肝豆狀核變性不同基因突變類型青霉胺治療分析
　　入組病例包括40例首診的肝豆狀核變性患者，將患者分為

8、Arg778Leu突變組和非Arg778Leu突變組，均使用青霉胺進行驅(qū)銅治療，定期于治療后1、3、6、12月檢測:血清銅、血清銅藍蛋白、24小時尿銅、ALT、HA、PCⅢ、LN和Ⅳ-C，探討不同基因突變類型的治療效果。
　　結(jié)果：
　　第一章：肝豆狀核變性513例流行病學研究
　　1.入組病例包括肝型245例(47.8％)，腦型180例(35.1％)，其他類型35例(6.8％)，混合型53例(10.3％)。以肝癥狀為

9、首發(fā)癥狀者為271例(52.8％)，以神經(jīng)系統(tǒng)首發(fā)癥狀為201例(39.2％)，以其他癥狀為首發(fā)癥狀者為41例(8％)。
　　2.該研究發(fā)現(xiàn)，肝型、腦型與其他類型相比血清銅藍蛋白水平存在顯著差異;肝型、腦型、其他類型與混合型相比，血清銅藍蛋白的改變具有統(tǒng)計學意義?；旌闲脱邈~藍蛋白降低更為明顯。
　　3.和腦型與混合型相比，肝型患者中血清ALT平均值顯著升高（P＜0.05）。
　　4.HA、PCⅢ、LN、CⅣ在各臨床分

10、型間均在顯著差異。其他類型的血清HA值與肝型、腦型和混合型存在顯著差異;血清PCⅢ檢測發(fā)現(xiàn)，其他類型與肝型、腦型和混合型相比差異具有統(tǒng)計學意義。血清LN檢測發(fā)現(xiàn)，腦型、其他類型、混合型和肝型相比，腦型與混合型相比差異具有統(tǒng)計學意義;血清CⅣ檢測，肝型、腦型與混合型相比差異具有統(tǒng)計學意義。
　　5.肝纖維化或肝硬化各臨床分型相比差異具有統(tǒng)計學意義。肝型患者中82％的患者超聲檢查顯示肝纖維化或肝硬化，腦型、其他類型和混合型肝纖維化或肝

11、硬化所占比例分別為:66％、43％、68％。因此肝型患者出現(xiàn)肝纖維化或肝硬化的比例遠遠高于其他類型的肝豆狀核變性患者。
　　第二章：WD基因突變位點的檢測與分析
　　1.發(fā)現(xiàn)62個ATP7B變異位點，其中23個為已知的致病突變位點，6個為首次發(fā)現(xiàn)的錯義、插入和缺失突變。
　　2.第8、11、12和13外顯子為高頻率突變熱點，并且堿基替換較其他突變類型更為常見，提示我們在WD患者人群中堿基替換是主要的突變類型。其中，位于

12、第8外顯子2333G＞T檢出頻率最高(即Arg778Leu)，達到47％。13號外顯子2975C→T位點突變頻率達22％。
　　第三章：肝豆狀核變性患者基因型和臨床表型關系的研究
　　1.52例肝豆狀核變性患者中Arg778Leu突變患者與非Arg778Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍蛋白、ALT、肝纖維化指標的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.52例肝豆狀核變性患者中

13、Pro992Leu突變與非Pro992Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、24小時尿銅、血清銅和銅藍蛋白、肝纖維化指標的差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　3.52例肝豆狀核變性患者中Arg778Leu突變24小時尿銅水平低于非Arg778Leu突變患者(P＜0.05)。
　　4.52例肝豆狀核變性患者中Pro992Leu突變患者其ALT水平低于非Pro992Leu突變組（P＜0.05）。

14、>　　第四章：肝豆狀核變性不同基因突變類型青霉胺治療分析
　　1.青霉胺治療12個月后，Arg778Leu攜帶者24小時尿銅下降水平的更為明顯（P＜0.05）。
　　2.青霉胺治療12個月后，Arg778Leu突變組的Ⅳ-C的下降更為明顯(P＜0.05)。
　　3.青霉胺治療后Arg778Leu與血清銅、血清銅藍蛋白、ALT、HA、PCⅢ和LN均未見明顯相關性。
　　結(jié)論：
　　1.各臨床分型相比ALT、H

15、A、PCⅢ、LN、CⅣ的差異具有統(tǒng)計學意義，肝纖維化或肝硬化與臨床分型顯著相關。
　　2.發(fā)現(xiàn)有62個ATP7B變異位點，其中23個為已知的致病突變位點，6個為首次發(fā)現(xiàn)的錯義、插入和缺失突變。
　　3.第8、12和13外顯子為我國人群高頻率突變位點。
　　4.52例Arg778Leu突變24小時尿銅水平低于非Arg778Leu突變患者; Pro992Leu突變患者其ALT水平低于非Pro992Leu突變組。
　　

16、5.52例Arg778Leu突變患者與非Arg778Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍蛋白、ALT、肝纖維化指標之間無顯著性差異。
　　6.52例Pro992Leu突變與非Pro992Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、24小時尿銅、血清銅和銅藍蛋白、肝纖維化指標之間無顯著性差異。
　　7.青霉胺治療后12個月Arg778Leu突變組較非Arg778Leu突變組2