內(nèi)毒素所致幼鼠腸屏障功能損傷及谷氨酰胺干預(yù)的研究.pdf

1、嚴(yán)重感染是兒科危重癥中胃腸功能障礙(gastrointestinal dysfunction)的常見病因之一。內(nèi)毒素可通過內(nèi)源性細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的釋放，腸道免疫功能的破壞，腸道細(xì)胞的凋亡的增加等因素致腸屏障功能破壞；而腸屏障功能破壞又會(huì)使大量細(xì)菌移位從而加重內(nèi)毒素血癥，致多器官功能障礙(衰竭)，甚至引起死亡。所以治療胃腸功能障礙就成為預(yù)防和治療多器官功能障礙的關(guān)鍵。 近期研究表明，谷氨酰胺(glutamine)在嚴(yán)重疾病、胃腸

2、營養(yǎng)、免疫、腫瘤治療等方面有很重要的作用，尤其是在危重病、應(yīng)激和創(chuàng)傷的情況下，疾病和創(chuàng)傷狀態(tài)可以導(dǎo)致血漿中谷氨酰胺的水平明顯下降，如果能及時(shí)補(bǔ)充谷氨酰胺，可以減少病人的感染率及死亡率。 本實(shí)驗(yàn)采用18日齡幼年大鼠內(nèi)毒素血癥模型，觀察其小腸上皮細(xì)胞的病理改變，血漿D-乳酸、血漿及小腸組織DAO濃度的動(dòng)態(tài)變化，以及谷氨酰胺干預(yù)后上述指標(biāo)的改變情況，以探討內(nèi)毒素血癥幼年大鼠腸屏障功能損傷及谷氨酰胺干預(yù)對腸道的作用。 實(shí)驗(yàn)材料及

3、方法： 1．材料用腹腔注射內(nèi)毒素(5mg/kg大腸桿菌脂多糖)方法制備18日齡大鼠內(nèi)毒素血癥模型，腹腔注射同等量生理鹽水為對照組，腹腔注射內(nèi)毒素同時(shí)灌胃谷氨酰胺(2mg/kg)為谷氨酰胺干預(yù)組，分別在注射后立即(只限于對照組，為0點(diǎn)對照)，1.5h、6h、24h、72h、7d取距離回盲部12cm近端的一段完整小腸組織，長約5cm，冷藏生理鹽水灌注清除小腸內(nèi)容物，放入0.1mol/L PBS配置的10％甲醛固定。取距回盲部1cm近

4、端小腸組織10cm，冷藏生理鹽水沖凈腸內(nèi)容物，濾紙吸干，加入磷酸鹽緩沖液(0.1M，PH7.2)勻漿，10000g<'*>30min、4℃離心，取上清液，-20℃保存。取內(nèi)毒素血癥1.5h組及正常對照組幼鼠各一塊小腸組織(約1.5mm×1.5mm大小)，用2.5％戊二醛及1％鋨酸雙重固定。心臟取血約1ml，肝素0.02ml(1％肝素鈉生理鹽水溶液)抗凝，3200r/min、4℃離心10min，分離血漿，-20℃保存。每組8只。2．方法H

5、E染色光鏡及透射電鏡觀察小腸絨毛的病理變化，分光光度計(jì)法檢測血漿及小腸勻漿DAO、血漿D-乳酸含量。用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用方差分析。 結(jié)果： 一、幼年大鼠內(nèi)毒素血癥組織學(xué)觀察結(jié)果經(jīng)HE染色光鏡觀察，正常對照組小腸絨毛細(xì)長、發(fā)達(dá)，排列緊密，腸壁結(jié)構(gòu)清晰。內(nèi)毒素血癥1.5h組可見小腸絨毛軸心水腫、變性；6h組可見絨毛水腫加重，有炎性細(xì)胞浸潤；24h組可見絨毛間質(zhì)淋巴濾泡形成、淋巴組織增生明顯

6、；72h組可見增生修復(fù)絨毛、淋巴組織增生明顯；7d組可見小腸自身修復(fù)。 電鏡下，正常對照組未見任何異常表現(xiàn)。內(nèi)毒素血癥1.5h組可見細(xì)胞間隙變寬，微絨毛絨毛萎縮，線粒體嚴(yán)重腫脹，呈空泡變性，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，核糖體脫落，染色質(zhì)濃縮分布在核周邊，可見核仁碎裂消失，并可見到凋亡小體。 二、幼年大鼠內(nèi)毒素血癥血漿DAO、小腸勻漿DAO、血漿D-乳酸含量變化正常對照組幼鼠血漿DAO活性是0.824±0.167，腸道組織DAO活性是0.

7、332±0.062，血漿D-乳酸水平是3.389±0.423。內(nèi)毒素血癥1.5h、6h、24h、72h、7d組幼鼠血漿DAO活性分別是1.142±0.303、1.377±0.272、1.729±0.245、1.209±0.222、0.666±0.190。小腸組織相應(yīng)時(shí)相DAO的活性分別是0.266±0.039、0.240±0.039、0.220±0.039、0.258±0.055、0.275±0.037。內(nèi)毒素血癥1.5h、6h、24h

8、、72h、7d組血漿D-乳酸的水平分別是4.131±0.141、4.298±0.127、4.240±0.093、4.305±0.152、4.244±0.047。 三、谷氨酰胺對內(nèi)毒素血癥幼年大鼠血漿DAO、小腸勻漿DAO、血漿D-乳酸含量的影響谷氨酰胺干預(yù)組血漿DAO值在6h、24h、72h及3d預(yù)防組比內(nèi)毒素血癥組相應(yīng)時(shí)相組降低；小腸組織DAO值較內(nèi)毒素血癥組相應(yīng)時(shí)相組有明顯升高。谷氨酰胺干預(yù)組血漿D-乳酸值在6h、24h、7

9、2h、7d及3d預(yù)防組比內(nèi)毒素血癥組有明顯的降低。 結(jié)論： 1.腹腔注射LPS引起的內(nèi)毒素血癥可以使動(dòng)物出現(xiàn)行為學(xué)及小腸組織學(xué)的異常。 2．腹腔注射LPS可以引起小腸組織損傷、腸道通透性增加及腸屏障功能障礙。提示血漿DAO及D-乳酸可以作為反映腸道屏障功能的指標(biāo)。 3．谷氨酰胺干預(yù)可降低血漿DAO及D-乳酸含量，提高小腸組織DAO含量，且病理學(xué)結(jié)果顯示谷氨酰胺對小腸絨毛有促修復(fù)作用。提示谷氨酰胺對腸道損傷