GPR4配體溶血卵磷脂及鞘氨醇磷脂酰膽堿介導(dǎo)HUVEC細(xì)胞生長及其相關(guān)信號通路.pdf

1、目的：研究GPR4（G protein-coupled receptor 4，GPR4）配體溶血卵磷脂（lysophosphatidylcholine，LPC）及鞘氨醇磷脂酰膽堿（sphingosylphosphorylcholine，SPC）對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）的生長效應(yīng)及有關(guān)信號通路。 方法：采用脂質(zhì)體2000將裝有GPR4受體基因的p

2、EFneo真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HUVEC，并通過G418（800μg/ml）篩選獲得GPR4基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株；RT-PCR法鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并檢測轉(zhuǎn)染前后GPR4受體mRNA的表達(dá)情況；MTT法檢測細(xì)胞的生長活力；AO染色法觀察LPC及SPC對HUVEC細(xì)胞造成的形態(tài)改變； Western blot法檢測LPC及SPC與其受體相互作用后對caspase-3前體、p-JNK、p-Akt及MMP-2蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：成功獲得了GPR

3、4基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株；隨著LPC（0.5，1，2，4，8μmol/l）及SPC(0.25,0.5,1.0μmol/l)濃度的增加, LPC使HUVEC細(xì)胞活力下降， 570nm OD值依次為：1.50±0.136；1.45±0.050；1.42±0.208；1.36±0.191；1.32±0.122；1.08±0.189。SPC使細(xì)胞活力依次增強(qiáng)，570nm OD值依次為：1.08±0.089；1.15±0.097；1.21±0.096

4、；1.30±0.11。LPC對細(xì)胞造成一定的損傷，隨著濃度的增加，有些細(xì)胞可見致密濃染的黃綠色，而SPC卻對細(xì)胞形態(tài)沒有造成明顯的改變。LPC使caspase-3前體蛋白的表達(dá)先增加后減少，MMP-2蛋白的表達(dá)下調(diào)，活化JNK激酶，使p-JNK蛋白的表達(dá)先增加后減少。SPC使p-Akt及MMP-2的表達(dá)先增加后減少，抑制caspase-3前體蛋白的表達(dá)。 結(jié)論： 1. LPC與受體GPR4作用后使HUVEC細(xì)胞活性下降，