溶血磷脂酰膽堿對血管平滑肌細胞的增殖作用及其信號通路.pdf

1、目的：研究溶血磷脂酰膽堿(LPC)對人血管平滑肌細胞的增殖作用,并闡明其受體介導信號轉導機理。
　　 內容培養(yǎng)的人大動脈平滑肌細胞,用LPA和LPC及LPA受體特異性拮抗劑Ki16425和Gi蛋白特異性抑制劑PTX刺激2-3d,MTT比色法觀察AoSMCs增殖;實時熒光定量PCR分析LPA受體和Autotaxin的基因表達量;采用蛋白印跡技術檢測血管平滑肌細胞在受到L,PA、LPC、Ki16425和PTX刺激后,觀察ERK1/2

2、在磷酸化程度上的差別。
　　 結果： MTT法顯示LPA、LPC均能促進AoSMCs增殖,且Ki16425和PTX均能抑制它們的增殖作用。熒光定量RT-PCR結果表明,在AoSMCs細胞中,LPA1-5五個受體均有表達,其中LPA1受體的表達量遠遠高于其它幾個受體。Autotaxin基因在血管平滑肌細胞中大量表達,并且顯示出很高的磷脂酶D活性,使LPC轉化為LPA。Western blot結果表明,用LPA、LPC和PDGF單獨

3、刺激AoSMC細胞均能使ERK1/2信號通路活化。與Ki16425同時作用和PTX預處理AoSMC細胞時,LPA和LPC誘導的p-ERK1/2水平明顯降低,而PDGF誘導的ERK1/2磷酸化水平未受影響。
　　 結論：1)研究首次發(fā)現(xiàn),血管平滑肌細胞本身表達的Autotaxin參與由LPC刺激細胞的增殖作用。在細胞和細胞培養(yǎng)液中均檢測到Autotaxin的蛋白表達和磷脂酶D的活性。2)LPC在胞外通過LPC-LPA1和LPC-L