中心體γ-tubulin、Nek2及染色體異常與乳腺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系研究.pdf

1、工作目的：本研究通過細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和遺傳學(xué)手段，分析中心體γ-tubulin及其調(diào)控因子Nek2在乳腺上皮惡變過程中各階段的表達(dá)變化，結(jié)合相關(guān)染色體變化與乳腺癌的關(guān)系，探索乳腺癌發(fā)生演變機(jī)制，為早期癌變浸潤基因治療靶點(diǎn)的篩選提供理論依據(jù)。
　　研究方法：選取正常乳腺組織、不典型增生、高低級(jí)別導(dǎo)管內(nèi)癌、高低級(jí)別浸潤性導(dǎo)管癌組織6組共210例樣本，采用免疫組化技術(shù)和流式細(xì)胞免疫熒光技術(shù)分別定性、半定量、定量檢測(cè)中心體γ–tub

2、ulin和Nek2蛋白表達(dá)水平及分析其意義；采用地高辛標(biāo)記mRNA原位雜交技術(shù)和實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)分別定性、半定量、定量檢測(cè)γ–tubulin和Nek2mRNA表達(dá)水平及分析其意義；采用比較基因組雜交技術(shù)，檢測(cè)染色體DNA拷貝數(shù)增益和或缺失情況，并分析染色體異常區(qū)段相關(guān)基因變化。
　　研究結(jié)果：在正常乳腺組織，不典型增生，導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤性導(dǎo)管癌這個(gè)發(fā)展進(jìn)程中，中心體γ-tubulin和Nek2的蛋白和mRNA表達(dá)水平呈上升趨

3、勢(shì)，在浸潤性導(dǎo)管癌和導(dǎo)管內(nèi)癌中顯著增加。γ-tubulin和Nek2的表達(dá)呈正相關(guān)性。DNA異倍體組中γ-tubulin和Nek2的表達(dá)量明顯高于DNA二倍體組。γ-tubulin中/高表達(dá)組染色體DNA異常變化數(shù)顯著多于γ-tubulin陰性/低表達(dá)組。過半數(shù)不典型增生樣本中γ-tubulin和Nek2的蛋白及mRNA的表達(dá)水平高，且與低級(jí)別癌樣本中的表達(dá)水平無顯著差異。低級(jí)別癌的染色體平均增益數(shù)、缺失數(shù)及總的變化數(shù)均明顯低于高級(jí)別癌

4、，但是與浸潤性癌之間差異無顯著性。不典型增生樣本中染色體異常水平明顯高于癌組織樣本，與低級(jí)別癌樣本有共同的變化位點(diǎn)。高級(jí)別原位癌和浸潤性癌具有相同的染色體及其位點(diǎn)的遺傳學(xué)異常，有多個(gè)共同的缺失位點(diǎn)。
　　結(jié)論：中心體γ-tubulin和Nek2的蛋白和mRNA異常表達(dá)可能在促使乳腺細(xì)胞過度增殖、惡變和轉(zhuǎn)化的過程中起重要作用，它們可做為早期癌變浸潤基因治療的潛在靶點(diǎn)；不典型增生的細(xì)胞遺傳學(xué)變化先于形態(tài)學(xué)上的改變，可能與低級(jí)別癌發(fā)生存