NEK9異常表達在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究.pdf

1、目的:乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，近年來發(fā)病率逐年上升，已躍居女性惡性腫瘤的第一位。手術切除輔以術后化療和內(nèi)分泌治療是乳腺癌治療的主要方法。近年來，乳腺癌的分子機制研究和治療取得了巨大進展，但乳腺癌仍然嚴重危害女性的生命及生活質(zhì)量，其中腫瘤局部擴散、淋巴結轉移和遠處臟器轉移是影響患者預后和限制生存率的主要原因。深入研究乳腺癌的分子發(fā)病機制，探索浸潤、轉移的機制，尋找新的抗癌策略，可以為乳腺癌患者尤其是缺乏有效治療的患者提供新的靶向治療，有

2、效提高病人預后及生存率。Nek9是Nek家族成員之一，Nek9在中心粒復制、分離和紡錘體的形成等細胞周期過程中起重要作用，Nek9的異常表達也可以引起胞質(zhì)的異常分裂及同源染色體的錯誤分離，目前為止，關于Nek9的相關研究，尤其是其在腫瘤中作用的報道甚少。本研究擬檢測Nek9在乳腺癌及常見良性乳腺疾病中的表達情況，研究其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，并初步探討其作用機制。
　　方法:收集乳腺癌及常見良性乳腺病變標本，并完善相關臨床病理資

3、料。采用免疫組化方法檢測浸潤性乳腺癌及正常乳腺組織、乳腺增生、纖維腺瘤、導管內(nèi)癌中NEK9蛋白的表達情況，比較同一病例浸潤性癌與導管上皮增生、導管內(nèi)癌、浸潤癌以及淋巴結內(nèi)轉移癌之間的表達差異，并分析NEK9表達水平與臨床病理指標的之間的關系。分別將siRNA和含Nek9的質(zhì)粒瞬時轉染進激素受體陽性乳腺癌MCF-7細胞系，將含Nek9的質(zhì)粒轉染進三陰性乳腺癌細胞系MDA-MB-468，Western blot檢測Nek9的干擾效率和過表達

4、效率。EdU實驗檢測轉染前后腫瘤細胞增殖能力的變化;遷移與浸潤實驗觀察Nek9對腫瘤細胞遷移浸潤能力的影響;通過流式細胞技術檢測Nek9對細胞周期和細胞凋亡的影響。
　　結果:在316例浸潤性導管癌中，NEK9的表達與組織學級別(p＜0.0001)、腫瘤大小(p=0.0087)、HER-2擴增(p=0.0016)、p53突變(p＜0.0001)、ki67高表達(p=0.0020)顯著相關;與ER、PR表達呈負相關，結果有統(tǒng)計學意義

5、(p＜0.0001);三陰性乳腺癌中NEK9表達降低或缺失明顯高于其他分子亞型(p＜0.0001)。我們發(fā)現(xiàn)激素受體陽性乳腺癌中，導管內(nèi)癌、浸潤性癌、腋窩淋巴結轉移癌中NEK9表達依次降低(p＜0.0001)，但導管內(nèi)癌與導乳腺增生之間NEK9表達沒有差異。體外實驗中證實沉默Nek9可以促進細胞增殖、遷移和浸潤，抑制凋亡，同時導致處于G2和M期的腫瘤細胞增多，同樣的，將Nek9的質(zhì)粒瞬時轉染進乳腺癌細胞系中，細胞的遷移浸潤能力受到抑制，

6、細胞增殖能力下降，促進細胞凋亡，同時處于G2和M期的細胞減少，影響細胞周期過程。
　　結論:
　　1.在乳腺浸潤性導管癌中，NEK9的表達與腫瘤大小、組織學級別、HER-2擴增、p53功能失常、高增殖指數(shù)呈負相關，與ER、PR的表達水平呈正相關。
　　2.NEK9表達降低或缺失多見于三陰性乳腺癌，細胞實驗亦顯示封閉Nek9促進三陰性乳腺癌腫瘤細胞生長，Nek9或參與了三陰性乳腺癌的發(fā)病。
　　3.同一病例中，從導

7、管內(nèi)癌到浸潤性導管癌到腋窩淋巴結轉移，NEK9的表達逐步下降，體外實驗也證實干擾Nek9可促進乳腺癌細胞遷移和浸潤，提示Nek9在乳腺癌的侵襲轉移中發(fā)揮重要作用。
　　4.NEK9表達異?？赡芡ㄟ^抑制細胞凋亡、細胞周期G2/M檢測點失控，從而促進細胞增殖，參與三陰性乳腺癌的發(fā)生，并在乳腺癌的浸潤、轉移過程中發(fā)揮作用。
　　5.NEK9有望成為新的生物標記物，幫助發(fā)現(xiàn)新的乳腺癌分子亞型，為乳腺癌的診斷、治療、預后提供新的研究依