大鼠局灶性腦缺血再灌注后腦水腫及腦組織5-脂氧合酶表達(dá)的動(dòng)態(tài)觀察.pdf

1、目的：腦血管病(cerebral vascular disease，CVD)是導(dǎo)致人類死亡的三大疾病之一，嚴(yán)重影響人類的預(yù)期壽命和生活質(zhì)量，且以缺血性腦血管病最常見(jiàn)。大量研究發(fā)現(xiàn)腦組織的缺血性損傷是多種因素共同作用的結(jié)果，包括自由基損傷、興奮性毒性、鈣超載、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)等。腦水腫是腦缺血后一個(gè)重要的病理環(huán)節(jié)，可引起并加重繼發(fā)性神經(jīng)損傷，甚至形成腦疝，危及患者生命，是影響患者急性期生存的重要因素。盡管目前缺血性腦血管病在預(yù)防和治療方

2、面取得了一些進(jìn)展，但其發(fā)生后的腦組織損傷的具體機(jī)制還未明確，因而成為臨床和基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。5-脂氧合酶(5-liDoxygenase，5-LO)是機(jī)體催化花生四烯酸生成炎癥介質(zhì)白三烯的關(guān)鍵酶，近年來(lái)的研究表明5-LO參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺血后的炎癥反應(yīng)、外傷性腦損傷、膠質(zhì)瘤形成、老年退行性病變等病理過(guò)程。本研究的目的在于建立穩(wěn)定的大鼠局灶性腦缺血再灌注動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分、測(cè)定腦組織含水量的變化規(guī)律、觀察5-LO在腦組織中的

3、動(dòng)態(tài)表達(dá)，進(jìn)而探討5-LO在缺血再灌注后的腦水腫形成和繼發(fā)性神經(jīng)損傷中的作用及意義。 方法：采用健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，參照Longa等的線栓法制作大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞(middlecerebral artery occlusion，MCAO)模型，缺血3 h后拔除栓線實(shí)現(xiàn)再灌注。假手術(shù)對(duì)照組不插入栓線。術(shù)后6 h、24 h、48 h、72 h對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，包括Longa評(píng)分法(LongaSco

4、re)、Berderson評(píng)分法(Berderson Score)、平衡木評(píng)分法(Balance Beam Score)。然后將動(dòng)物斷頭處死，取出完整的腦組織，去除嗅球及額極前部4 mill腦組織，取其后2 mm厚的腦組織用來(lái)測(cè)量病變同側(cè)和病變對(duì)側(cè)的腦含水量，應(yīng)用干濕重法測(cè)量的計(jì)算公式為：(WW-DW)/WW×100％余下的腦組織經(jīng)4％多聚甲醛固定、酒精梯度脫水、石蠟包埋，冠狀切成5 μm厚的石蠟切片，相鄰組織切片分別用做蘇木精一伊紅染

5、色和免疫組織化學(xué)染色。常規(guī)蘇木精．伊紅染色觀察炎細(xì)胞浸潤(rùn)、腦組織水腫、神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的改變等病理變化，免疫組化方法觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織5-LO的表達(dá)情況。 結(jié)果：①術(shù)后6 h各組大鼠的三種行為學(xué)評(píng)分分值都很高，考慮為藥物麻醉和手術(shù)損傷所致，沒(méi)有實(shí)際意義。24 h開(kāi)始，評(píng)分趨于穩(wěn)定可信。24～72 h缺血再灌注組大鼠的行為學(xué)明顯異常，行為學(xué)評(píng)分分值明顯高于假手術(shù)對(duì)照組，且以48 h時(shí)神經(jīng)功能缺損最為明顯。②再灌注后6 h病

6、變側(cè)腦組織含水量開(kāi)始升高，但與假手術(shù)對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，P>0.05。24 h明顯升高(82.42±0.118)％，48 h達(dá)到高峰(85.40±0.099)％，持續(xù)至72 h，與假手術(shù)對(duì)照組和病變對(duì)側(cè)比較，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。③再灌注后6 h缺血皮質(zhì)神經(jīng)元皺縮呈三角形，神經(jīng)元細(xì)胞核濃染，毛細(xì)血管充血擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，血管周圍間隙擴(kuò)大；24 h缺血范圍進(jìn)一步擴(kuò)大；48 h缺血腦組織高度腫脹，部分區(qū)域可見(jiàn)不規(guī)

7、則灶片出血；72 h病變周圍出現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞增生，新生血管形成；6 h可見(jiàn)缺血腦組織有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，24 h、48 h浸潤(rùn)明顯；假手術(shù)對(duì)照組組織結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)明顯病理學(xué)改變。④5-LO陽(yáng)性細(xì)胞為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，且主要表達(dá)在缺血區(qū)神經(jīng)元，光鏡下陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色。假手術(shù)對(duì)照組腦組織5-LO陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少，再灌注6 h組大鼠缺血腦組織5-LO陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，24 h時(shí)陽(yáng)性表達(dá)至高峰，陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)為31.63±3.35，再灌注48 h、72 h時(shí)

8、，5-LO陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)仍維持在一定水平。與假手術(shù)對(duì)照組比較，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)采用線栓法制作的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型較為穩(wěn)定、成熟，是腦缺血再灌注基礎(chǔ)研究和治療干預(yù)研究較為理想的動(dòng)物模型。大鼠行為學(xué)評(píng)分和腦組織含水量隨時(shí)間的變化趨勢(shì)相一致，說(shuō)明腦水腫的形成和發(fā)展是造成神經(jīng)功能缺損的主要原因之一，腦缺血再灌注后5-LO的表達(dá)與腦水腫發(fā)生發(fā)展及炎細(xì)胞浸潤(rùn)規(guī)律基本一致，由此提示5-LO參與了缺