白蛋白治療對大鼠腦缺血再灌注后VEGF表達(dá)和腦水腫的影響.pdf

1、目的：缺血性腦血管病(Ischemiccerebralvasculardisease，ICVD)是臨床常見病，臨床發(fā)病率高、死亡率高，復(fù)發(fā)率高，即使是幸存者，其高致殘率也為患者、家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)，但是目前對于腦缺血性疾病還沒確切的治療方法。25％的人血白蛋白對于腦卒中有比較好的神經(jīng)保護(hù)作用，可以明顯的改善患者神經(jīng)缺陷，減小腦梗死體積，改善腦水腫，有利于患者的遠(yuǎn)期預(yù)后和功能恢復(fù)[1]。血管內(nèi)皮生長因子(Vascularendoth

2、elialgrowthfactor，VEGF)是一種強(qiáng)有力的促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，血管再生，增強(qiáng)血管滲透性的物質(zhì)。研究認(rèn)為：VEGF促進(jìn)有絲分裂的作用有助于維持缺血后殘存的神經(jīng)細(xì)胞活性，血管再生有助于恢復(fù)供血，但是在腦缺血性疾病的早期，VEGF主要增強(qiáng)血腦屏障(Blood-brainbarrier，BBB)的通透性，加劇腦水腫和引起一系列繼發(fā)性的腦損害[2]。 目前，對于白蛋白的神經(jīng)保護(hù)作用還僅停留在血流動力學(xué)方面的研究[3]，對于

3、白蛋白治療腦缺血后早期VEGF表達(dá)和對腦水腫的影響國內(nèi)外尚未見報道。前期試驗表明，在腦缺血的早期白蛋白組VEGFmRNA水平的表達(dá)雖然高于正常水平，但與生理鹽水組比較是降低的。在此基礎(chǔ)上，我們推測在腦缺血性疾病的早期，白蛋白治療保護(hù)作用可能與VEGF表達(dá)的改變有關(guān)。為進(jìn)一步證實這一點，本實驗利用25％的人血白蛋白治療腦缺血，檢測白蛋白對腦缺血后內(nèi)源性VEGF表達(dá)和腦水腫的影響，這將有助于更加全面的認(rèn)識在腦缺血早期白蛋白和VEGF之間的相

4、互作用，為臨床治療缺血性腦血管病提供實驗依據(jù)，促進(jìn)病人康復(fù)。 方法：將大鼠隨機(jī)分為白蛋白組、生理鹽水組和假手術(shù)組，利用改良的大腦中動脈閉塞方法造局灶性腦缺血模型，在腦缺血2h再灌注后立即靜脈給予人血白蛋白治療，或者給予等體積的生理鹽水作為生理鹽水組。在腦缺血再灌注后的6、24、48h觀察大鼠的神經(jīng)缺陷評分，利用TTC染色驗證模型的成功。在腦缺血再灌注24h，利用TTC法測量腦梗死大小，干.濕重法觀察腦組織含水量。在腦缺血再灌注后

5、6、24、48h，測量血清中的白蛋白含量，用酶聯(lián)免疫吸附劑(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA)法在這三個時間點測量大鼠血清VEGF蛋白含量的改變；用WesternBlot檢測大鼠患側(cè)腦組織內(nèi)的VEGF的蛋白表達(dá)；免疫組織化學(xué)法觀察VEGF在大鼠腦內(nèi)的空間分布特點。 結(jié)果：1驗證模型的成功：TTC染色可見造模成功的病灶處出現(xiàn)缺血缺氧的白色改變。 2神經(jīng)缺陷評分：所有進(jìn)行過MCAo的

6、大鼠在麻醉清醒后，均有不同程度的神經(jīng)缺陷。與生理鹽水組比較，白蛋白組神經(jīng)功能缺陷評分在24、48h明顯降低(p<0.05)，提示給予白蛋白治療后可以改善大鼠的神經(jīng)缺陷。 3血清白蛋白水平的變化：白蛋白組的血清白蛋白含量在6、24、48h比生理鹽水組都明顯升高(p<0.05)，與術(shù)前比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義上的差異(p>0.05)。 4在腦缺血再灌注后24h，白蛋白組腦組織含水量、梗死大小與生理鹽水組比較都明顯降低(p<0.05

7、)，提示給予白蛋白治療后可改善缺血后24h的腦水腫，降低腦梗死范圍，保護(hù)腦組織。 5在腦缺血再灌注后6、24、48h，白蛋白組大鼠血清VEGF含量與生理鹽水組比明顯降低(p<0.05)，患側(cè)半球腦組織內(nèi)VEGF的表達(dá)與生理鹽水組比也明顯降低(p<0.05)，但依然高于正常水平。提示缺血后給予白蛋白治療，在缺血后6-48h降低內(nèi)源性高表達(dá)的VEGF，可以改善腦水腫，降低腦梗死體積。 6免疫組化示：生理鹽水組VEGF主要表達(dá)

8、在梗死區(qū)周圍的神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，。在脈絡(luò)叢，軟腦膜，腦室周圍有強(qiáng)陽性表達(dá)，微小血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)也有強(qiáng)陽性表達(dá)。白蛋白組在梗死周圍的神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)的強(qiáng)度低于生理鹽水組，在脈絡(luò)叢、軟腦膜和腦室周圍雖然也有陽性表達(dá)，但強(qiáng)度均弱于生理鹽水組，而在微血管的表達(dá)也低于生理鹽水組。假手術(shù)組僅在微血管有少量表達(dá)。 結(jié)論：1給予白蛋白治療，在腦缺血早期6-48h，減輕腦水腫，降低腦梗死體積，改善神經(jīng)功能缺陷，維持血清白蛋白的水平。 2給予