肝腎陰虛型甲亢和脾腎陽(yáng)虛型甲減的血漿蛋白質(zhì)組學(xué)比較分析.pdf

1、甲狀腺功能亢進(jìn)癥（hyperthyroidism，簡(jiǎn)稱(chēng)甲亢）系由多種病因?qū)е录谞钕俟δ茉龈?，甲狀腺素（TH）分泌過(guò)多所致的臨床綜合征。在中醫(yī)學(xué)中歸屬“癭瘤”范疇，其發(fā)病原因主要在于“肝腎陰虛”。而與之相反，甲狀腺功能減退癥（hypothyroidism,簡(jiǎn)稱(chēng)甲減）則是由于甲狀腺激素合成和分泌減少或組織利用不足導(dǎo)致的全身代謝減低綜合征。在中醫(yī)學(xué)中歸屬“虛勞”或“虛損”范疇，其發(fā)病原因主要在于“脾腎陽(yáng)虛”。甲亢是內(nèi)分泌系統(tǒng)的常見(jiàn)病、多發(fā)病，

2、每年發(fā)生率高達(dá)2～3‰，且有逐年增高的趨勢(shì)；甲減則是一種很難治愈的疾病，因此目前降低甲亢甲減的發(fā)生率是一項(xiàng)非常重要的任務(wù)。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)利用雙向凝膠電泳及質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)肝腎陰虛型甲亢和脾腎陽(yáng)虛型甲減病人的血漿蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。以期從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度研究其血清中蛋白質(zhì)的變化，從而闡述甲亢甲減的發(fā)病機(jī)理，為早診斷早治療提供的理論依據(jù)。
　　方法：取正常、甲亢、甲減患者血清各8例，分別混合后用抗白蛋白和免疫球蛋白的親和層析柱去除高

3、豐度蛋白質(zhì)，用超濾離心法對(duì)樣品進(jìn)行除鹽濃縮。進(jìn)行蛋白質(zhì)雙向電泳分離，經(jīng)圖象掃描、軟件分析得到差異蛋白質(zhì)。挖取差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)膠內(nèi)酶解后，用質(zhì)譜儀測(cè)定后獲得肽指紋圖譜，所得結(jié)果與蛋白質(zhì)組文庫(kù)進(jìn)行比對(duì)。
　　結(jié)果：三組實(shí)驗(yàn)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，肝腎陰虛型甲亢和正常對(duì)照組平均蛋白點(diǎn)數(shù)為456個(gè)；脾腎陽(yáng)虛型甲減和正常對(duì)照組平均蛋白點(diǎn)數(shù)為522個(gè)；肝腎陰虛型甲亢和脾腎陽(yáng)虛型甲減組患者的平均蛋白點(diǎn)為582個(gè)。膠內(nèi)酶切后經(jīng)基質(zhì)輔助激光電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（

4、MALDI TOF MS+MS/MS）進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：肝腎陰虛型甲亢和正常對(duì)照組比較，12個(gè)蛋白點(diǎn)被確定，其中4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)均降低：視黃醇結(jié)合蛋白、甲狀腺素結(jié)合蛋白B鏈、轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、載脂蛋白Apo-Ⅳ；其余蛋白點(diǎn):鉀通道調(diào)節(jié)蛋白、β2-微球蛋白、人類(lèi)白細(xì)胞DR抗原β1（HLA-DRβ1）、MHC-Ⅱ、胰島素生長(zhǎng)因子-2、果糖二磷酸醛縮酶C、核轉(zhuǎn)錄因子kB亞單位及蛋白酪氨酸磷酸酶表達(dá)均升高。脾腎陽(yáng)虛型甲減和正常對(duì)照組比較，蛋白點(diǎn)表達(dá)均

5、升高的是：轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、前載脂蛋白 A-I、Na/H交換蛋白1、STarD6、鋅a-2糖蛋白A鏈，其余蛋白如MHC-Ⅱβ鏈、泛素C末端水解酶、胰島素生長(zhǎng)因子-2和磷酸肌醇激酶4表達(dá)降低。肝腎陰虛型甲亢與脾腎陽(yáng)虛型甲減比較，前載脂蛋白A-Ⅰ和轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白表達(dá)降低，NADH輔酶脫氫酶E鏈、短鏈脫氫酶/還原酶、丙酮酸激酶、細(xì)胞色素 P450、超氧化物歧化酶2、干擾素調(diào)節(jié)因子5、胰島素生長(zhǎng)因子-2、血紅素氧合酶蛋白均升高。
　　結(jié)論：

6、肝腎陰虛型甲亢組能量代謝活躍，氧化磷酸化和檸檬酸循環(huán)加速。在以MHC-II和NF-kB的過(guò)度表達(dá)為核心的細(xì)胞因子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子功能紊亂，可能引發(fā)了甲狀腺功能亢進(jìn)的發(fā)生。這些發(fā)現(xiàn)提示肝腎陰虛證的發(fā)病機(jī)理和能量代謝亢進(jìn)、神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)失衡等有相關(guān)性。相反，脾腎陽(yáng)虛型甲減組能量代謝減低，合成代謝的速度大于分解代謝的速度。其發(fā)病機(jī)理可能是通過(guò)下調(diào)胰島素生長(zhǎng)因子2和干擾素因子5的表達(dá)，和氧應(yīng)激、細(xì)胞免疫、信號(hào)傳遞等存在相關(guān)性。肝腎陰虛型甲