脾陰虛癡呆大鼠海馬蛋白質(zhì)組學(xué)及滋補(bǔ)脾陰方藥干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以潛隱性起病、癡呆進(jìn)行性加重為特征，嚴(yán)重影響了老年人的認(rèn)知功能與行為能力。滋補(bǔ)脾陰(Zi-Bu-Pi-Yin，ZBPY)方藥以滋補(bǔ)脾陰為立方原則，針對(duì)脾陰虛證而設(shè)，以往研究顯示其具有顯著的抗衰老和腦保護(hù)作用。蛋白質(zhì)組學(xué)及其研究技術(shù)為我們深入認(rèn)識(shí)機(jī)體蛋白質(zhì)整體水平的改變提供了可能的途徑，因此從蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究AD的發(fā)病機(jī)理，篩選AD標(biāo)記物及早

2、期診斷和深入研究藥物作用機(jī)制等都有著積極的意義。 目的：為有效地模擬臨床本課題建立脾陰虛癡呆證病結(jié)合大鼠模型，采用ZBPY方藥對(duì)模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)動(dòng)物模型的脾陰虛征象與學(xué)習(xí)記憶的影響；運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析脾陰虛癡呆組與脾陰虛癡呆+ZBPY組大鼠海馬蛋白質(zhì)的差異表達(dá)，從整體蛋白分子水平探索脾陰虛癡呆本質(zhì)以及ZBPY方藥的作用靶點(diǎn)。 方法：采用飲食不節(jié)、勞倦過度、耗傷陰液的復(fù)合因素方法建立脾陰虛大鼠模型，在此基礎(chǔ)上

3、于雙側(cè)海馬定位注射聚合態(tài)β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)<,1-40>，實(shí)現(xiàn)脾陰虛癡呆證病結(jié)合模型的建立。應(yīng)用ZBPY方藥干預(yù)，觀察各組體征變化；由跳臺(tái)儀和Morris水迷宮進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，比較各組學(xué)習(xí)記憶能力的改變；通過雙向凝膠電泳(tWO dimensionalgel electrophoresis，2-DE)比較空白對(duì)照組、脾陰虛癡呆組、脾陰虛癡呆+ZBPY組大鼠海馬蛋白表達(dá)圖譜；由基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 (m

4、atrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry，MALDI-TOF-MS)技術(shù)鑒定表達(dá)差異的蛋白。 結(jié)果：1．脾陰虛組和脾陰虛癡呆組出現(xiàn)飲水量增加(P<0.01)，肛溫升高(P<0.01)等陰虛內(nèi)熱癥狀；癡呆組和脾陰虛癡呆組學(xué)習(xí)記憶能力降低 (P<0.05)；脾陰虛癡呆+ZBPY組脾陰虛表現(xiàn)和學(xué)習(xí)記憶能力均有所改善(P<0.05

5、)。2．以空白對(duì)照組為配比標(biāo)準(zhǔn)，脾陰虛癡呆組有9個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)差異在1.5倍以上，其中6點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，3點(diǎn)表達(dá)下調(diào)；脾陰虛癡呆+zBPY組有2個(gè)差異點(diǎn)，其中1點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，1點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。經(jīng)質(zhì)譜分析鑒定顯示脾陰虛癡呆組大鼠海馬蛋白中，表達(dá)上調(diào)的有annexin Ⅲ(膜聯(lián)蛋白Ⅲ)，下調(diào)的有tubulin beta chain 15(微管蛋白β鏈15)、dihydropyrimidinase-like 2(二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白2，DRP-2)，以及g

6、uanine nucleotide-binding protein beta-1 subunit(鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白β-1亞單位)，經(jīng)ZBPY方藥干預(yù)后這些蛋白點(diǎn)的表達(dá)與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。 結(jié)論：1．本研究成功建立了脾陰虛癡呆大鼠的證病結(jié)合模型，并觀察了證、病、證病結(jié)合模型在體征和行為學(xué)方面的變化。2．脾陰虛癡呆大鼠海馬的病變是一個(gè)多種蛋白質(zhì)參與的復(fù)雜過程。Annexin Ⅲ、tubulinbeta chain 15、