慢性乙型肝炎肝內(nèi)cccDNA定量測定的臨床意義研究.pdf

1、[目的]乙型肝炎病毒(HBV)感染的分子生物學研究表明，在}tBV持續(xù)性感染、治療停止后病情反跳以及耐藥方面，共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)起著關(guān)鍵的作用。目前有關(guān)cccDNA的了解多來源于土撥鼠和鴨乙型肝炎病毒模型的研究，但從病人中收集的資料很少，國內(nèi)還未有相關(guān)報道。 應用熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)方法檢測慢性乙型肝炎(CHB)肝組織HBVcccDNA定量，研究肝組織HBVcccDNA定量與組織及血清HBV

2、DNA定量、HBsAg滴度、肝實質(zhì)損害程度及肝組織病理等的關(guān)系，以探討cccDNA在CHB診斷和治療中的重要臨床價值。 [方法]75例CHB患者均來自我院2004年1月～8月住院病人，男59例，女16例，年齡17～48歲，平均33歲。所有患者診斷符合2000年第十次全國病毒性肝炎學術(shù)會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》，并排除甲、丙、丁、戊型肝炎和其他原因所致肝損害。所有病例院外半年內(nèi)未行抗病毒治療，根據(jù)HBeAg的情況，分

3、為HBeAg陽性慢性乙型肝炎和ftBeAg陰性慢性乙型肝炎兩組，兩組資料在年齡、性別、病程等方面均具有可比性。10例非乙肝患者包括：丙肝2例，自身免疫性肝炎1例，脂肪肝3例，酒精肝2例，不明原因肝損害2例作為對照。應用Rochelight-cycler熒光PCR檢測儀檢測肝組織cccDNA、組織和血清HBV DNA的拷貝數(shù)、全自動生化分析儀檢測肝功能(ALT等指標)、Roche全自動電化學發(fā)光免疫分析儀檢測血清HBsAg滴度、肝組織進行

4、炎癥活動度分級(G)及纖維化程度分期(S)等，進行統(tǒng)計學分析。 [結(jié)果] 1．慢性乙型肝炎患者肝組織均檢測到cccDNA，定量為1.56×10<'3>拷貝/mg3.04×10<'6>拷貝/mg(對數(shù)值：4.45±1.23)；肝組織HBVDNA定量3.12×10<'4>拷貝/mg～2.34×10<'7>拷貝/mg(對數(shù)值：4.89±1.29)；血清HBVDNA定量是3.95×10<'4>拷貝/ml～5.34×

5、10<'8>拷貝/ml(對數(shù)值：5.12±1.43)。 2.肝組織cccDNA定量與組織、血清HBV DNA定量的相關(guān)性：肝組織cccDNA定量與組織HBVDNA定量呈高度相關(guān)(對數(shù)值：4.45±1.23與4.89±1.29，r＝0.737，P<0.001)；肝組織cccDNA定量與血清HBV DNA定量亦呈正相關(guān)(4.45±1.23與5.12±1.43，r＝0.427，P<0.005)。 3．HBeAg陽性患者肝組織

6、cccDNA定量(對數(shù)值：5.33±1.17)、肝組織HBVDNA定量(對數(shù)值：6.12±1.2)、血清HBVDNA定量(對數(shù)值：6.50±1.56)高于HBeAg陰性患者肝組織cccDNA定量(對數(shù)值：3.56±1.28)、肝組織HBVDNA定量(對數(shù)值：4.24±1.34)和血清HBVDNA定量(對數(shù)值：4.34±1.64)；兩兩比較差異均有顯著性(P<0.05)。 4．血清HBsAg滴度均值：762±201.35COI。肝

7、組織cccDNA定量與血清HBsAg滴度的關(guān)系：肝組織cccDNA定量與血清HBsAg滴度呈正相關(guān)(r＝0.718，P<0.005)。 5．肝組織cccDNA定量與肝實質(zhì)損害指標血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、血漿凝血酶原時間(PT)均不具相關(guān)性(P>0.05)。 6.肝組織cccDNA定量與肝組織病理的關(guān)系：肝組織cccDNA定量與肝組織炎癥活動度(G)及纖維化程度(S)無明顯關(guān)系。 [

8、結(jié)論] 1.肝組織cccDNA定量水平可直接反映體內(nèi)HBV感染及復制情況，是較血清HBV DNA、HBeAg更可靠的指標，存在HBVcccDNA是判斷HBV感染的金標準，尤其在血清HBV DNA低至檢測水平以下時，cccDNA在CHB診斷和抗病毒治療中具有重要臨床價值和意義。 2.肝組織cccDNA定量與血清HBV DNA定量呈正相關(guān)，在臨床上動態(tài)檢測慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA負荷，有利于了解其肝組織cccD

9、NA負荷的變化；但是由于乙型肝炎患者HBV DNA和肝組織中cccDNA水平相關(guān)性不太強，不能通過血清HBV DNA負荷來妄加推測肝組織cccDNA負荷水平。3．HBeAg陽性患者肝組織cccDNA定量、組織和血清HBV DNA定量均比HBeAg陰性患者較高，證實了HBeAg是病毒在體內(nèi)高度復制的指標之一；抗-HBeAg(+)表明病毒復制減弱，傳染性降低，但抗-HBeAg(+)的病例仍可檢出HBVDNA、cccDNA，仍有較強傳染性和