HBV cccDNA及HBsAg定量對(duì)慢性乙型肝炎患兒抗病毒療效應(yīng)用價(jià)值的研究.pdf

1、本研究通過(guò)定量檢測(cè)肝組織HBV cccDNA及血清HBsAg含量，分析兩者之間及與血清HBV DNA載量、肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg和HBcAg表達(dá)強(qiáng)度等臨床指標(biāo)的相關(guān)性，探討二者在評(píng)價(jià)HBeAg陽(yáng)性的CHB患兒抗病毒療效中的應(yīng)用價(jià)值。
　　研究共隨機(jī)選取HBeAg陽(yáng)性CHB患兒63例，留取常規(guī)病理檢剩余石蠟包埋肝組織的同時(shí)留取血清樣本。應(yīng)用不降解質(zhì)粒的依賴(lài)ATP的DNA聚合酶(PSAD)消化+滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)+跨缺口實(shí)時(shí)熒光定量PCR

2、方法檢測(cè)肝組織HBV cccDNA含量;電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)血清HBsAg含量及乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物(HBV-M);熒光定量PCR法檢測(cè)血清HBV DNA載量及HBV基因型;美國(guó)BECKMAN AU5621全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST水平。對(duì)肝組織進(jìn)行常規(guī)病理染色，觀察肝組織炎癥活動(dòng)度(G)和纖維化程度(S);免疫組化法檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg和HBcAg表達(dá)強(qiáng)度。抗病毒治療48周時(shí)HBsAg是否發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換作為抗病毒療

3、效的判定標(biāo)準(zhǔn)，t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)進(jìn)行單因素分析;Logistic回歸方法進(jìn)行多因素分析;pearson簡(jiǎn)單相關(guān)和Spearman等級(jí)相關(guān)法分析肝組織HBV cccDNA、血清HBsAg兩者之間及與其它臨床檢測(cè)指標(biāo)之間的相關(guān)性;受試者工作特征曲線(xiàn)(ROC)評(píng)估肝組織HBV cccDNA及血清HBsAg定量對(duì)抗病毒療效的預(yù)測(cè)價(jià)值;配對(duì)四格表x2檢驗(yàn)分析肝組織HBV cccDNA及血清HBsAg定量對(duì)抗病毒療效的預(yù)測(cè)價(jià)值有無(wú)差異性。
　　

4、研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，13例患兒接受抗病毒治療48周時(shí)發(fā)生了HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，HBsAg清除率為20.6％。HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換(R)組年齡明顯小于HBsAg未發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換(N-R)組(1.68±0.71vs6.47±3.16，P=0.000)，血清AST(1.85±0.15vs1.98±0.31，P=0.04)、肝組織HBVcccDNA(6.38±0.79vs6.79±0.66,P=0.04)、血清HBsAg(3.48±1.22vs4.

5、14±0.69，P=0.009)及肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg表達(dá)強(qiáng)度(P=0.012)R組均低于N-R組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血清ALT、HBV DNA載量、性別、HBV基因型、肝組織炎癥活動(dòng)度、纖維化程度及肝細(xì)胞內(nèi)HBcAg表達(dá)強(qiáng)度在兩組間分布的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05）。多因素分析結(jié)果顯示，血清HBsAg、肝組織HBV cccDNA及年齡三個(gè)變量對(duì)CHB患兒抗病毒療效的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝組織HBV cccDNA與血清HBsAg定

6、量(r=0.464，P=0.000)呈正相關(guān)性，二者與HBV DNA載量呈正相關(guān)性(r=0.665，P=0.000;r=0.512，P=0.000)。肝組織HBV cccDNA、血清HBsAg分別與血清ALT、AST、肝組織炎癥活動(dòng)度、纖維化程度均無(wú)相關(guān)性(P均＞0.05）;肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg表達(dá)強(qiáng)度與肝組織HBVcccDNA定量無(wú)相關(guān)性(r=-0.024，P=0.854)，與血清HBsAg定量(r=0.258，P=0.041)呈正相關(guān)

7、性;肝組織HBV cccDNA定量在肝細(xì)胞HBcAg不同表達(dá)強(qiáng)度組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)，而血清HBsAg定量在肝細(xì)胞HBcAg不同表達(dá)強(qiáng)度組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.203)。肝組織HBV cccDNA定量以0.08log10copies/cell為最佳臨界值(cut-off)用于預(yù)測(cè)抗病毒治療48周時(shí)HBsAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(PPV)和陰性預(yù)測(cè)值(NPV)分別為92.0％、46.2％、

8、86.8％和60.0％;血清HBsAg定量以3.681og10IU/mL為cut-off預(yù)測(cè)抗病毒治療48周時(shí)HBsAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換的靈敏度、特異度、PPV和NPV分別為86.0％、69.2％、91.2％和56.3％;肝組織HBV cccDNA、血清HBsAg定量對(duì)抗病毒療效預(yù)測(cè)價(jià)值的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.146)。
　　血清HBsAg、肝組織HBV cccDNA及年齡是影響HBeAg陽(yáng)性的CHB患兒抗病毒療效的主要因素。肝

9、組織HBV cccDNA與血清HBsAg定量呈正相關(guān)性，二者與血清HBV DNA均呈正相關(guān)性，二者結(jié)合血清ALT、AST、肝組織炎癥活動(dòng)度、纖維化程度臨床檢測(cè)指標(biāo)，可全面評(píng)價(jià)CHB患兒病情變化。肝組織HBV cccDNA與血清HBsAg相比其更能精確反映HBV在肝細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制情況，血清HBsAg反映的HBV感染狀態(tài)，但二者對(duì)評(píng)估HBeAg陽(yáng)性的CHB患兒遠(yuǎn)期的抗病毒療效均有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。因此，對(duì)于HBeAg陽(yáng)性的CHB患兒，血清HBs