乙肝肝硬化及肝細(xì)胞癌的血清代謝組學(xué)研究.pdf

1、背景：肝細(xì)胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是我國最常見的惡性腫瘤之一，其惡性程度高、預(yù)后差，常繼發(fā)于慢性乙型肝炎、肝硬化（Liver cirrhosis，LC）。HCC起病隱匿、早期缺乏典型癥狀，多數(shù)患者在確診時已發(fā)展到中晚期，往往錯過治療的最佳時機(jī)。重要的是，我國近80％HCC是由乙肝導(dǎo)致的LC演變而來，因此LC患者是HCC發(fā)生的高危人群。雖然目前已有多種鑒別HCC和LC的檢測方法，如AFP、超聲、CT

2、、MRI及病理活檢等，但仍較難在HCC早期給予明確診斷。鑒于代謝組學(xué)（Metabonomics）是通過定性、定量分析細(xì)胞或機(jī)體內(nèi)低分子量代謝產(chǎn)物，來監(jiān)測機(jī)體或活細(xì)胞中代謝變化的一門新興科學(xué)，在尋找疾病分子診斷標(biāo)記物方面已有成果。因此，本研究采用核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）技術(shù)分析乙肝肝硬化（Hepatitis B virus Induced LC，HBV-LC）、HCC與健康對照者的血清代謝組

3、學(xué)，以期篩選出具有顯著性差異的血清代謝物，并探索其作為鑒別HBV-LC與HCC分子生物標(biāo)志物的可行性。
　　方法：收集16例HBV-LC患者、29例HCC患者和20例健康對照者的清晨空腹血液，經(jīng)預(yù)處理后，利用基于核磁共振（NMR）的血清代謝組學(xué)技術(shù)，獲取各組樣品1HNMR圖譜。將1HNMR全譜數(shù)據(jù)歸一化后，輸入SIMCA-P軟件進(jìn)行主成分分析（Principal Component Analysis，PCA）和正交偏最小二乘法判別

4、分析（Orthogonal Partial least Squares discriminant analysis，OPLS-DA），并分別建立模型。根據(jù)變量投影重要性值（variable importance projection，VIP）及載荷值對代謝標(biāo)志物進(jìn)行初步篩選，再采用SPSS17.0軟件對得到變量行配對樣本t檢驗(yàn)，排除P>0.05的變量，篩選出可區(qū)分HBV-LC和HCC的代謝標(biāo)志物，并探討其涉及的代謝過程。
　　結(jié)果

5、：基于NMR技術(shù)對HBV-LC、HCC與健康對照組的血清代謝組學(xué)分析，所建立的PCA模型顯示：對照組的聚集、分布能夠和實(shí)驗(yàn)組區(qū)分開，但HBV-LC組與HCC組的分布有重疊，提示兩組間可能存在某些共同的代謝變化；進(jìn)一步運(yùn)用OPLS-DA模式識別，可將HBV-LC組、HCC組與對照組較好地區(qū)分開來，提示PCA和OPLS-DA模型皆可用于鑒別診斷HBV-LC和HCC。對VIP值較大的小分子代謝物進(jìn)行鑒定及分析發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，HBV-LC、

6、HCC患者的血清乳酸升高，膽堿、甲酸降低；牛磺酸在HBV-LC患者中升高，而在HCC患者中降低。與HBV-LC組相比，HCC患者血清中亮氨酸、乳酸、丙氨酸、膽堿、甘氨酸升高，?；撬?、甲酸降低。
　　結(jié)論：本研究應(yīng)用NMR技術(shù)分析HBV-LC、HCC和健康對照組間的血清代謝組學(xué)，建立的PCA和OPLS-DA模型可區(qū)分 HBV-LC、HCC和正常人群。HBV-LC和HCC患者血清中的乳酸、膽堿、?；撬?、甲酸水平與對照組比較存在顯著差異