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1、目的:探討ERKl/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在匹羅卡品致癇小鼠苔蘚纖維出芽中的作用。 方法:建立C57BL/6小鼠匹羅卡品慢性癲癇模型,以免疫組化法檢測(cè)磷酸化ERKl/2的時(shí)空表達(dá)規(guī)律,以Neo-Timm銀染法檢測(cè)致癇后小鼠海馬內(nèi)分子層苔蘚纖維出芽的動(dòng)態(tài)變化,再以ERKl/2特異性抑制劑SL327干預(yù)通路激活,觀察抑制ERKl/2磷酸化前后苔蘚纖維出芽的改變,并加以分析比較。 結(jié)果: L行為學(xué)觀察:PILO模型組80%(2
2、8/35)的動(dòng)物發(fā)展為癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)并存活,死亡率為11.43%,自發(fā)性發(fā)作(SRS)次數(shù)為4.00±1.13次/只;SL327干預(yù)組88%(3l/35)的動(dòng)物發(fā)展為SE并存活,死亡率為2.86%,SRS次數(shù)為2.07±0.80次/只;生理鹽水對(duì)照組無(wú)癇性發(fā)作。 2.病理學(xué)觀察:對(duì)照組海馬各區(qū)神經(jīng)元無(wú)明顯變化。模型組SE后30min各區(qū)與對(duì)照組相比無(wú)明顯改變;SE后6h可見CAl區(qū)神經(jīng)元變性和壞死顯著,CA3區(qū)和門區(qū)有輕度
3、神經(jīng)元脫失,齒狀回顆粒細(xì)胞形態(tài)基本完整;SE后12hCAl區(qū)壞死加重,CA3區(qū)和門區(qū)神經(jīng)元脫失明顯,齒狀回有輕度神經(jīng)元變性;SE后24hCAl區(qū)神經(jīng)元壞死脫失最為嚴(yán)重;SE3d后各區(qū)神經(jīng)元損傷逐漸恢復(fù)。SL327干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元損傷與模型比較明顯減輕。 3.磷酸化ERKl/2的表達(dá):對(duì)照組p-ERKl/2在海馬僅見于神經(jīng)纖維,模型組SE后30minp-ERKl/2的表達(dá)在齒狀回顆粒細(xì)胞達(dá)高峰,CAl區(qū)其次,CA3區(qū)和門區(qū)主要
4、在神經(jīng)纖維表達(dá);6hp-ERKl/2在CA3區(qū)達(dá)高峰,門區(qū)其次,CAl區(qū)較30min減少,齒狀回幾乎沒有表達(dá);12h各區(qū)表達(dá)均明顯減少;24h恢復(fù)對(duì)照組水平。SL327干預(yù)組p-ERKl/2的表達(dá)幾乎被完全抑制。 4.苔蘚纖維出芽:模型組內(nèi)分子層苔蘚纖維出芽從SE后第7d開始出現(xiàn),14d逐漸增多,30d達(dá)高峰,而對(duì)照組沒有觀察到出芽。SL327干預(yù)組苔蘚纖維出芽在7d、14d、30d的抑制率分別為24.85%、27.74%和43
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