STAT3在匹羅卡品致癇鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增生中的作用.pdf

1、目的：研究匹羅卡品致癇狀態(tài)下大鼠海馬內(nèi)活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3 (p-STAT3)表達(dá)規(guī)律及星形膠質(zhì)細(xì)胞增生的情況，探討STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在癲癇時(shí)星形膠質(zhì)細(xì)胞增生中的作用。 方法：采用氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射方法建立大鼠顳葉癲癇模型，腹腔注射STAT3特異性抑制劑 AG490建立干預(yù)組模型，對(duì)照組以生理鹽水代替匹羅卡品腹腔注射；免疫組織化學(xué)方法對(duì)照觀察阻滯JAK/STAT 通路前后大鼠海馬p-STAT3與膠質(zhì)原纖維酸性

2、蛋白(GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的變化規(guī)律，并用雙重免疫熒光方法觀察p-STAT3與GFAP陽(yáng)性細(xì)胞間的關(guān)系。 結(jié)果： 1．行為學(xué)觀察：生理鹽水對(duì)照組大鼠無(wú)任何癇性發(fā)作。PILO模型組有85.00％(34/40)的動(dòng)物達(dá)Racine分級(jí)Ⅲ級(jí)以上發(fā)作；7.50％(3/40)的大鼠死亡；7.50％(3/40)的大鼠未達(dá)Ⅲ級(jí)發(fā)作；動(dòng)物反復(fù)自發(fā)性發(fā)作(SRS)為4.52±1.49次/只。AG490干預(yù)組大鼠Ⅲ級(jí)以上發(fā)作的發(fā)生率為82

3、.50％(33/40)；死亡率為15.00％(6/40)；2.50％(3/40)的大鼠未達(dá)Ⅲ級(jí)發(fā)作；SRS僅為1.26±0.78次/只。 2．組織病理學(xué)觀察：對(duì)照組海馬各區(qū)神經(jīng)元無(wú)明顯變化。PILO模型組大鼠SE后3h，海馬門(mén)區(qū)、CA1、CA3區(qū)開(kāi)始散在出現(xiàn)神經(jīng)元變性、壞死，細(xì)胞排列不整齊，少量神經(jīng)細(xì)胞脫失；至SE3d時(shí)，上述病理改變達(dá)到高峰，齒狀回顆粒細(xì)胞也開(kāi)始出現(xiàn)變性；SE15d時(shí)，神經(jīng)元受損狀況漸恢復(fù)，細(xì)胞排列漸整齊。AG

4、490干預(yù)組與PILO模型組比較，各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞損傷情況明顯減輕。 3．免疫組化結(jié)果：生理鹽水對(duì)照組中，p-STAT3 在大鼠腦組織呈胞漿淺染色，極少有胞核免疫陽(yáng)性反應(yīng)；而PILO模型組中，p-STAT3則主要在胞核表達(dá)，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目在SE3h時(shí)即開(kāi)始增多，以CA1、CA3和齒狀回門(mén)區(qū)為主，于SE3d時(shí)達(dá)到高峰，之后漸下降，至SE30d時(shí)仍比正常水平略高；AG490干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)p-STAT3胞核陽(yáng)性表達(dá)均較PILO組明顯減

5、少。生理鹽水對(duì)照組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量很少，胞體小，突起少而細(xì)??；PILO模型組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞胞體截面積增大、突起及其分支增多，且其細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律與p-STAT3陽(yáng)性細(xì)胞類似；AG490干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)的GFAP陽(yáng)性表達(dá)均較PILO組明顯減弱。 4．雙重免疫熒光結(jié)果：GFAP陽(yáng)性細(xì)胞胞漿呈綠色星狀，p-STAT3陽(yáng)性細(xì)胞胞核呈紅色圓形或橢圓形，且可以發(fā)現(xiàn)p-STAT3陽(yáng)性胞核位于GFAP陽(yáng)性細(xì)胞胞漿中，提示STAT3的激活發(fā)生

6、于反應(yīng)性增生的星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。 結(jié)論：氯化鋰-匹羅卡品慢性癲癇模型能夠復(fù)制出與人類顳葉癲癇相似的行為學(xué)和病理學(xué)改變。海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞增生在癲癇發(fā)作早期是對(duì)癇性發(fā)作和神經(jīng)元損傷的適應(yīng)性反應(yīng)，而晚期則可能促進(jìn)癲癇的復(fù)發(fā)。STAT3信號(hào)通路在癲癇后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)被激活，提示其活化可能促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性增生。AG490可阻斷SLAT3的激活，同時(shí)影響癲癇大鼠行為學(xué)改變、病理學(xué)變化及星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生，提示其對(duì)癲癇發(fā)作可能有抑制