原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者VCP表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性及機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討含纈酪肽蛋白(valosin-containing protein，VCP)表達(dá)水平與原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者預(yù)后的相關(guān)性，及VCP對人淋巴瘤細(xì)胞凋亡及增殖能力的影響。
　　方法:1.58例原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者眶內(nèi)淋巴瘤組織石蠟標(biāo)本，采用免疫組化法檢測VCP表達(dá)水平，并對VCP表達(dá)水平與患者復(fù)發(fā)情況及生存率的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用X2檢驗(yàn)及Fisher精確檢驗(yàn)來分析VCP蛋白表達(dá)與各臨床因素之間的關(guān)系;Ka

2、plan-Meier法計(jì)算復(fù)發(fā)率、生存率，并繪制生存曲線;log-rank法計(jì)算組間差異，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　2.根據(jù)免疫組化結(jié)果即VCP蛋白表達(dá)水平，選取10例患者眶內(nèi)腫瘤石蠟組織（5例×2組）抽提總RNA，并應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)定量比較2組VCP基因表達(dá)水平的差異;
　　3.免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測人淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞及Daudi細(xì)胞VCP蛋白的表達(dá)。應(yīng)用特異、高效并操作方便的

3、RNAi技術(shù)，以VCP作為基因靶點(diǎn)，對Raji細(xì)胞建立有效的RNA干擾方法。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)基因si-VCP轉(zhuǎn)染Raji細(xì)胞，RT-qPCR及Westernblot分別從mRNA水平及蛋白水平評估Raji細(xì)胞VCP基因沉默效果;
　　4.流式細(xì)胞術(shù)檢測VCP基因沉默的人淋巴瘤Raji細(xì)胞凋亡率的變化;
　　5.MTS法檢測VCP基因沉默對Raji細(xì)胞增殖能力的影響。
　　結(jié)果:1.58例眼眶MALT淋巴瘤患者中13例(2

4、2.4％)患者出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)時(shí)間為10-56個月，其平均值為39.5個月。8例患者(13.8％)死于腫瘤，4例患者(6.9％)死于與腫瘤無關(guān)的其他原因。5年無瘤生存率及總生存率分別是70.7％、79.3％。5年無瘤生存時(shí)間為10-60個月，其平均值為54.7個月;5年總生存時(shí)間為24-60個月，其平均值為57.2個月。
　　2.58例原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者眶內(nèi)腫瘤組織VCP表達(dá)陽性細(xì)胞百分率為32％到95％。VCP表達(dá)陽

5、性細(xì)胞百分率的中位值為45％，低于或等于45％為VCP表達(dá)level1，高于45％為VCP表達(dá)level2。58例原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者眶內(nèi)腫瘤組織VCP表達(dá)水平與患者復(fù)發(fā)(P=0.003)及腫瘤大小(P=0.008)密切相關(guān)。VCP表達(dá)水平與患者年齡、性別、LDH水平、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、血清白蛋白水平、有無B癥狀等臨床特征無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。同時(shí)，VCP表達(dá)level1患者5年無瘤生存率及總生存率明顯高于leve

6、l2患者(P=0.001;P=0.032)。
　　3.10例患者眶內(nèi)腫瘤組織VCP mRNA表達(dá)水平與VCP蛋白表達(dá)水平一致，根據(jù)免疫組化結(jié)果level2組患者腫瘤組織VCP mRNA表達(dá)明顯高于level1組(P=0.009)。
　　4.人淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞及Daudi細(xì)胞VCP蛋白表達(dá)較強(qiáng)。利用脂質(zhì)體進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，VCP mRNA水平和蛋白表達(dá)水平分別被抑制65％和57％，基因沉默效果肯定。
　　5.流式細(xì)胞

7、術(shù)結(jié)果顯示，人淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞VCP基因沉默后，細(xì)胞凋亡明顯增強(qiáng)。
　　6.MTS結(jié)果顯示，人淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞VCP基因沉默后，細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制。
　　結(jié)論:1.VCP是評價(jià)原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者預(yù)后的良好指標(biāo)。
　　2.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)si-VCP對人淋巴瘤Raji細(xì)胞靶基因VCP的抑制效果明顯，VCP mRNA表達(dá)水平明顯降低，從而使VCP蛋白表達(dá)量明顯下降。
　　3.VCP基因沉