He-Ne激光照射對荷瘤小鼠T細胞CD59表達及活化信號轉導的作用研究.pdf

1、目的：本研究通過建立小鼠轉CD59卵巢癌細胞（WTA2780細胞）腫瘤模型，用低強度氦氖激光照射荷瘤小鼠胸腺區(qū)，以探討氦氖激光照射對荷瘤小鼠T細胞CD59表達及細胞活化信號轉導的作用，為腫瘤的靶向治療開辟一條新途徑。
　　 方法：選取BALB/C純系小鼠隨機分為四組：I組，正常對照組，不做任何處理。II組，致瘤組，僅致瘤但不進行激光照射。Ⅲ組，致瘤后每日進行胸腺區(qū)激光照射。Ⅳ組，致瘤后隔口進行胸腺區(qū)激光照射。記錄腫瘤生長曲線，于

2、第20天處死小鼠，分離培養(yǎng)小鼠胸腺T淋巴細胞。用CD59單克隆抗體作用各組T細胞，采用激光共聚焦顯微鏡檢測Fluo-3/Am負載的T細胞胞漿內(nèi)鈣離子的變化、流式細胞術檢測T細胞活化為CD25'T細胞的能力；MTT法（淋巴細胞轉化試驗）測T細胞增殖、免疫組化和免疫熒光測T細胞表面CD59的表達、ELISA檢測T細胞活化后白細胞介素2生成水平，并采用免疫組化的方法檢測腫瘤組織CD59表達情況。采用方差分析比較各組間的差異。
　　 結

3、果：腋窩皮下注射5×10?WTA2780細胞，成功構建了小鼠腫瘤模型。激光照射組(Ⅲ、Ⅳ組)瘤體直徑、重量均小于非激光照射組（Ⅱ組）；加入CD59-mAb lmin后，進行T細胞漿內(nèi)鈣離子濃度檢測，結果顯示Ⅱ組低于I組，Ⅲ、Ⅳ組高于Ⅱ組，Ⅲ、Ⅳ組間無明顯差異；各組T細胞經(jīng)CD59mAb刺激48h后，CD25-T細胞表達檢測顯示Ⅱ組明顯低于Ⅰ組，Ⅲ、Ⅳ細明顯高于Ⅱ組，Ⅲ、Ⅳ組間無明顯差異；荷瘤小鼠T細胞增殖率低于正常小鼠，激光照射組高于未

4、照射組；免疫組化可見荷瘤小鼠T細胞光密度低于正常，而激光照射后的荷瘤小鼠T細胞光密度高于未照射組；免疫熒光結果顯示，荷瘤小鼠T細胞熒光強度低丁止常小鼠，激光照射組則明顯高于未照射組，而每日照射組和隔日照射組之間未見明顯差異；酶聯(lián)免疫吸附試驗結果表明，Ⅱ組T細胞的IL2表達低于I組，激光照射后荷瘤小鼠IL2表達增加。各項結果均顯示，Ⅱ組和I組間差異P＜0.01；Ⅲ、Ⅳ組和Ⅱ組間差異P＜0.01；Ⅲ組，Ⅳ組間P＞0.05。
　　 結