CD3ζRNAi重組質(zhì)粒的構(gòu)建及對(duì)T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用研究.pdf

1、本研究采用設(shè)計(jì)的pSUPER-siCD59重組干擾載體，通過(guò)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞，探討CD59分子被特異性沉默前后對(duì)CD3分子介導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響，檢測(cè)T細(xì)胞活化通路相關(guān)信號(hào)分子變化及T細(xì)胞的增殖狀況來(lái)證實(shí)CD59分子對(duì)于CD3分子介導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否存在協(xié)同作用。并且相關(guān)研究也顯示CD59單抗交聯(lián)可介導(dǎo)T細(xì)胞早期的活化信號(hào)，推測(cè)TCR-CD3復(fù)合體中CD3可將TCR識(shí)別的信號(hào)傳入T細(xì)胞

2、內(nèi)誘導(dǎo)活化，而對(duì)于沉默CD3ζ時(shí)CD59分子作為GPI錨蛋白是否仍能向胞內(nèi)傳遞信號(hào)，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見(jiàn)報(bào)道。故本實(shí)驗(yàn)采用RNAi技術(shù)設(shè)計(jì)了針對(duì)CD3ζ的重組干擾載體，通過(guò)構(gòu)建CD3ζRNAi逆轉(zhuǎn)錄病毒載體來(lái)沉默細(xì)胞CD3ζ的表達(dá)，然后再次檢測(cè)活化過(guò)程中相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的變化，為后續(xù)研究CD59與CD3ζ在T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的相互作用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，亦為進(jìn)一步研究GPI類錨固蛋白參與T細(xì)胞活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制提供新思路，將為臨床免疫缺陷