2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建T細胞活化連接蛋白(LAT)-EGFP融合蛋白真核表達載體,以及利用基因點突變技術使LAT-EGFP的棕櫚酰化位點突變構建LAT-EGFP-M真核表達載體,并將兩種真核表達載體轉染入Jurkat細胞中穩(wěn)定表達,研究CD59在T細胞信號轉導過程中與LAT的相互作用,探討CD59向胞內(nèi)傳遞信號的機制。
   方法:從人T細胞白血病細胞Jurkat細胞中提取總RNA,利用RT-PCR的方法擴增LAT基因,構建LAT-EGFP

2、真核表達載體,并利用點突變技術使LAT-EGFP近膜處的棕櫚酰化位點的絡氨酸替換為甘氨酸,構建棕櫚?;稽c突變的LAT-EGFP-M真核表達載體;采用電轉染的方法轉染Jurkat細胞,雙抗交聯(lián)CD59后,熒光共聚焦顯微鏡下觀察LAT分布情況的變化;用噻唑藍(MTT)比色法檢測抗體交聯(lián)前各組后Jurkat細胞增殖情況差別;應用ELISA檢測各組細胞上清中IL-2的變化水平;用Western blot技術檢測抗體交聯(lián)后LAT-EGFP和LA

3、T-EGFP-M的磷酸化程度。
   結果:經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切、western blot技術及測序鑒定LAT-EGFP真核表達載體和LAT-EGFP-M構建成功;抗體交聯(lián)CD59之后,LAT-EGFP-M較LAT-EGFP相比不能定位聚集于CD59所在的脂筏區(qū)域,并且轉染了突變LAT-EGFP-M質粒的Jurkat細胞增殖速度和IL-2分泌能力低于轉染LAT-EGFP質粒的對照組。轉染空載體EGFP-N3及未轉染的細胞,LAT-

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