高效液相熒光法測定人尿液中兒茶酚胺濃度用于嗜鉻細胞瘤診斷及原發(fā)性高血壓的管理.pdf

1、機體內(nèi)兒茶酚胺類化合物（Catecholamines，CAs）主要包括去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、腎上腺素（epinephrine，E)、多巴胺(Dopamine，DA)。NE、E、DA是體內(nèi)重要的信息傳遞物質(zhì)，正常量的CAs在維持人體心臟泵血，血壓調(diào)節(jié)，能量代謝等多種生理功能平衡中起著極其重要的作用。過量的CAs則可導致多系統(tǒng)并發(fā)癥，尤其是心血管系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)。其中嚴重的心腦血管并發(fā)癥如高血壓危象、腦卒中等可

2、危及生命。而嗜鉻細胞瘤(pheochromocytoma，PHEO)恰是一種以大量分泌 CAs為典型生化學特征的腫瘤，通過檢測人體內(nèi) CAs的濃度，可為PHEO的診斷提供重要依據(jù)。研究已證實交感神經(jīng)興奮性增高是原發(fā)性高血壓(Essential hypertension，EH)重要的致病機制之一，NE、E作為交感神經(jīng)興奮性遞質(zhì)，通過測其濃度可快速直接地評估EH患者交感神經(jīng)興奮性，進而指導用藥，隨訪，風險因素干預等，為EH患者提供更有效的慢

3、病管理。
　　研究內(nèi)容包括以下三個部分：
　　1.建立人體尿液中CAs濃度檢測方法并進行方法學驗證
　　采用自制活性氧化鋁進行樣本處理，在弱堿性 Tris緩沖液條件下吸附尿液樣本中CAs，甲醇，蒸餾水洗滌，0.2 mol/L的HCl洗脫。高效液相熒光法測定，并進行方法學驗證。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重酒石酸去甲腎上腺素、腎上腺素、鹽酸多巴胺在1.56～1000ng/ml濃度范圍內(nèi)線性關系良好（r=0.9995、0.9997、0.99

4、98）；日內(nèi)及日間精密度RSD在0.31％～8.02%之間；高、中、低三個濃度的平均方法回收率在94.22%～108.69%之間。實驗結(jié)果表明，本方法專屬性高、線性范圍廣、準確穩(wěn)定、樣本處理簡便快速，適合臨床推廣應用。
　　2. CAs濃度檢測在PHEO診斷中的應用
　　根據(jù)PHEO臨床表現(xiàn)，確定PHEO可疑病例的篩查指征，于某三甲醫(yī)院收集疑似病例尿液樣本。采用高效液相熒光法（HPLC-FD），檢測患者尿液中NE、E、DA；

5、采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測NE、E中間代謝產(chǎn)物去甲變腎上腺素（normetanephrine，NMN）、變腎上腺素（metanephrine，MN）濃度；重氮鹽斑點法進行 CAs最終代謝產(chǎn)物香草苦杏仁酸（vanillylmandelic acid，VMA）的定性檢測。最終根據(jù)病理診斷，對比各指標在PHEO診斷中的優(yōu)劣。127例PHEO疑似病例尿液檢測結(jié)果：

6、11例尿液樣本NE、E、DA、NMN、MN濃度明顯高于正常范圍，其中NE、DA、NMN濃度達正常高值的2倍以上，高度疑似為PHEO，而該11例中VMA僅5例陽性。此11位患者中9例行手術治療，術后經(jīng)病理證實該9例為嗜鉻細胞瘤。實驗結(jié)果表明，對比VMA的定性檢測，NE、E、DA、NMN、MN的濃度檢測對于PHEO的診斷具有更為準確的參考價值。其中HPLC-FD法可同時檢測NE、E、DA，快速、經(jīng)濟，適合臨床推廣應用。
　　3. CA

7、s濃度與EH相關性分析并應用于EH的管理
　　經(jīng)知情同意，于某三甲醫(yī)院收集EH患者尿液樣本，門診、電話、QQ、微信等方式完善患者信息，建立EH患者慢病管理檔案。采用HPLC-FD法測定EH患者尿液中CAs濃度，與正常對照組比較，分析評估EH的風險因素，進行個體化的健康教育、用藥指導、危險因素干預等慢病管理，隨訪1年，2～4次/月。結(jié)果發(fā)現(xiàn)EH組CAs濃度顯著高于正常對照組，伴有吸煙、飲酒、BMI≥24、攝鹽量大、夜班風險因素的 E

8、H患者尿液中NE和E濃度顯著高于非風險因素 EH患者（p<0.05）。NE和DA濃度隨焦慮程度加劇而增高，呈一定的相關性。122例接受慢病管理滿一年的EH患者，高血壓認知水平有明顯改善（p<0.01），用藥依從性顯著提高（p<0.01），血壓達標率達92.6%。實驗結(jié)果表明，EH患者交感神經(jīng)興奮性高于正常組，CAs濃度與EH風險因素存在一定的相關性，CAs濃度的檢測為EH的慢病管理的開展提供一定的科學依據(jù)，而科學有效的慢病管理可顯著提高