拉科酰胺對大鼠脊髓傷害性通路突觸傳遞的影響.pdf

1、疼痛，是由于機體遭受外界的損傷性刺激后，初級傷害性感知神經(jīng)元被激活而引起，并表現(xiàn)為不愉快的情感體驗。其影響人群大、范圍廣，以至于世界衛(wèi)生組織（WHO）將疼痛與體溫、呼吸、脈搏、血壓相并列，稱為臨床第五大生命體征。國際學(xué)術(shù)界也提出：緩解疼痛是基本人權(quán)。傷害性疼痛是由于外周傷害性感受器被激活而引起，屬于生理性疼痛的范疇，其作用是警告以及保護機體、躲避傷害。而病理性疼痛的患者在臨床中通常表現(xiàn)為持續(xù)性或慢性病程，其產(chǎn)生是由于中樞神經(jīng)或外周神經(jīng)的

2、損傷或疾病而引起，并且這種類型的疼痛對機體并不具有保護作用，反而帶給患者深刻的痛苦。
　　在慢性疼痛中，最常見、最難治的是：神經(jīng)病理性疼痛（Neuropathic Pain，NP）。隨著對NP認(rèn)識和研究的不斷深入，2011年國際疼痛學(xué)會（IASP）將定義更新為：軀體感覺神經(jīng)損傷和（或）疾病而引起的疼痛。NP區(qū)別于其他疼痛的突出特點有以下三點：自發(fā)性疼痛、痛覺過敏和痛覺超敏。目前臨床對NP治療主要包括：藥物治療；和以心理治療、物理手

3、法治療、微創(chuàng)介入療法和外科手術(shù)為主的非藥物治療。但是臨床上其總體緩解率卻只有40~60％。非藥物治療價格昂貴；藥物治療是各種治療手段中最基本、最常用的，也最容易為患者所接受。但是，目前廣泛應(yīng)用的治療藥物如：麻醉性鎮(zhèn)痛藥、三環(huán)類抗抑郁藥、非甾體類抗炎藥和阿片類藥物等，因副作用較大、有些易產(chǎn)生依賴性，限制了其應(yīng)用。這就促使我們?nèi)ヌ接懜嗟闹委熓侄魏头绞?，研發(fā)出療效更好、副作用更少、依賴性更小的藥物。
　　比利時優(yōu)時比（UCB）公司開發(fā)

4、的拉科酰胺，屬于新型功能性氨基酸抗驚厥藥，NMDA受體甘氨酸結(jié)合位點拮抗劑，成人部分癲癇發(fā)作是該藥最初批準(zhǔn)上市時的主要適應(yīng)癥。之后的研究發(fā)現(xiàn)拉科酰胺具有雙重作用機制：一方面，該藥對電壓依賴性鈉離子通道（VGSC）慢失活狀態(tài)、非快失活狀態(tài)敏感，但對其快失活狀態(tài)不敏感；另一方面，它也能作用于海馬、丘腦等位點的塌陷反應(yīng)介導(dǎo)蛋白-2（CRMP-2)。之后的研究進一步發(fā)現(xiàn)，拉科酰胺對Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8敏感，越來越多的研究證實

5、：Nav1.8與疼痛信號的傳遞過程密切相關(guān)，甚至可能是潛在的閘門，在現(xiàn)代藥理學(xué)研究中Nav1.8已被作為神經(jīng)病理性疼痛藥物研究和治療的重要靶點。據(jù)文獻報道，拉科酰胺在臨床的研究和應(yīng)用中，能夠在一定程度上緩解患者癌性痛、骨關(guān)節(jié)炎性疼痛、腫瘤放化療后疼痛以及糖尿病周圍神經(jīng)痛[3,4,5,6,7,8]；在動物實驗中，拉科酰胺也表現(xiàn)出不同程度的抗傷害性痛的作用，如在大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型和大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型上顯示出良好的鎮(zhèn)痛效應(yīng)脊髓背角又被稱為脊

6、髓水平的“痛覺調(diào)控中樞”，但拉科酰胺在脊髓背角的鎮(zhèn)痛機制尚不清楚。因此探討其對脊髓傷害性神經(jīng)通路的作用機制，對將拉科酰胺開發(fā)成為理想的鎮(zhèn)痛藥提供功能基礎(chǔ)。
　　實驗一：拉科酰胺對大鼠神經(jīng)損傷引起的神經(jīng)病理性疼痛的鎮(zhèn)痛作用
　　目的：應(yīng)用大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎模型，觀察腹腔內(nèi)注射拉科酰胺鎮(zhèn)痛作用的時程和劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　方法：180～230 g SD雄性大鼠，術(shù)前測定其機械性縮足反射閾值，按照Kim的方法結(jié)扎大鼠腰5-6脊神經(jīng)

7、，制作脊神經(jīng)結(jié)扎模型（SNL模型）。剔除造模失敗的動物后，待大鼠神經(jīng)病理性疼痛形成穩(wěn)定（通常在術(shù)后三天），再隨機分為三組：溶劑對照組、大劑量LCM處理組（100 mg/kg）和小劑量LCM處理組（50 mg/kg）。LCM用生理鹽水稀釋，腹腔單次注射LCM作為LCM處理組，而腹腔注射等體積生理鹽水作為溶劑對照組。于注藥后5、15、30、45、60、90、120、150 min分別測量機械性縮足閾值，觀察拉科酰胺的鎮(zhèn)痛作用
　　結(jié)果

8、：大鼠術(shù)側(cè)機械性縮足反射閾值升高的情況只發(fā)生在LCM高劑量組，并且與溶劑組和小劑量處理組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01;SNK-q）。該作用最大值出現(xiàn)在腹腔內(nèi)注射后約40 min，并且持續(xù)到注藥后70 min仍未完全消失。而健側(cè)、拉科酰胺低劑量組及溶劑對照組PWMT值于加藥前后均沒有明顯改變（P>0.05）。
　　實驗二：拉科酰胺對大鼠傷害性感覺通路突觸傳遞的作用
　　目的：觀察拉科酰胺對大鼠脊髓傷害性細(xì)纖維（Aδ纖維、C

9、纖維）介導(dǎo)的興奮性突觸后電流（eEPSCs）的影響。
　　方法：雄性SD大鼠，3~5周齡，80-100g，人工腦脊液心臟灌注后分離脊髓，在脊髓腰膨大做帶后根的矢狀位切片。采用全細(xì)胞記錄的方式記錄脊髓背角Ⅱ?qū)由窠?jīng)元，輸入阻抗<10 MΩ，電壓鉗制-70 mv，記錄穩(wěn)定10min后，觀察拉科酰胺對傷害性細(xì)纖維支配的SDH神經(jīng)元突觸傳遞的影響。
　　結(jié)果：（1）拉科酰胺能夠抑制傷害性細(xì)纖維介導(dǎo)的單突觸II層神經(jīng)元恒壓電刺激后根誘發(fā)

10、的eEPSCs峰值，其作用呈現(xiàn)劑量依賴性。（2）拉科酰胺并不影響脊髓背角II層神經(jīng)元sEPSCs放電幅度，但對頻率表現(xiàn)為抑制(P<0.01;K-S test)。
　　結(jié)論：
　　1.拉科酰胺后對傷害性細(xì)纖維（Aδ纖維、C纖維）eEPSCs表現(xiàn)出抑制作用，且呈劑量依賴性。
　　2.拉科酰胺對脊髓背角淺層神經(jīng)元sEPSCs的頻率表現(xiàn)為抑制作用，但不影響其放電幅度，提示拉科酰胺的作用位點在突觸前膜。
　　3.對大鼠SN