高表達(dá)胰島素受體細(xì)胞膜色譜模型的建立.pdf

1、目的：胰島素是人體內(nèi)的重要的多肽，在治療I型和Ⅱ型糖尿病方面發(fā)揮了重要作用。但作為藥物用于糖尿病治療有其固有的缺點(diǎn)，研究激活胰島素受體的小分子化合物在一定程度上可以克服胰島素在生產(chǎn)和使用上存在的問題，不失為開發(fā)藥物的又一途徑。細(xì)胞膜色譜(CMC)是一種生物色譜，它將藥物效應(yīng)成分的分離和篩選結(jié)合到了一起，可以直接從天然產(chǎn)物中篩選特定的效應(yīng)成分，而采用高表達(dá)受體細(xì)胞系建立細(xì)胞膜色譜模型更是提高了靶點(diǎn)的特異性和效率，為抗糖尿病藥物研究開發(fā)提供

2、了新的細(xì)胞膜色譜模型。 方法： (1)胰島素與高表達(dá)胰島素受體CHO(IR.CHO)細(xì)胞特異性作用研究：用HP[，C檢測IR.CHO細(xì)胞和CHO細(xì)胞對低濃度胰島素的吸附量，以及高濃度的胰島素液與IR.CHO細(xì)胞和CHO細(xì)胞作用后洗脫液中胰島素的含量。(2)高表達(dá)胰島素受體CMC模型的建立和評價(jià)：制備IR-CHO細(xì)胞膜，將活性細(xì)胞膜固定在硅膠載體表面，形成硅膠載體細(xì)胞膜固定相(CMSP)，并將CMSP裝填入色譜柱中，建立CMC模型

3、。通過考察CMSP上Na'心.ATP酶活性性隨時(shí)間變化規(guī)律，從而確定CMC模型的壽命；測定CMSP柱前、柱后其上的蛋白含量，以此考察CMC系統(tǒng)的穩(wěn)定性；測定胰島素和對照品在CMC上的保留特性來考察模型的特異性。 結(jié)果：(1)低濃度的胰島素與CHO細(xì)胞和IR-CHO細(xì)胞結(jié)合后，HPI，C檢測到IR-CHO細(xì)胞吸附的胰島素遠(yuǎn)高于CHO細(xì)胞吸附的胰島素。(2)高濃度的胰島素與CHO細(xì)胞和IR.CHO細(xì)胞結(jié)合后，用pH3.4的磷酸鹽緩沖

4、液進(jìn)行洗脫，HP[。C檢測到IR-CHO細(xì)胞的沈脫液中有胰島素，而CHO細(xì)胞的洗脫液中未檢測到胰島素。(3)CMC模型具有細(xì)胞膜活性和色譜分離雙重特性，與硅膠柱具有完全不同的分離特性。 (4)CMSP酶活性隨放置時(shí)間延長其酶活性越低，同時(shí)，CMSP放置的溫度越低，CMSP酶活性降低越緩慢。(5)胰島素在所建立的CMC模型上具有保留特性，而對照品不與IR.CHO上的胰島素受體發(fā)生作用，在CMC模型上無任何保留特性。(6)胰島素在CMC柱上