基于病例-對(duì)照和家系MCF2L2基因與多囊卵巢綜合征相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分多囊卵巢綜合征不同亞型的臨床資料分析
　　 目的：多囊卵巢綜合征是一種復(fù)雜的、異質(zhì)性疾病，其典型的臨床表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)或閉經(jīng)、高雄激素血癥、卵巢多囊樣改變。但是，PCOS的每一項(xiàng)臨床表現(xiàn)幾乎都不是其所特有的，PCOS的這種異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了對(duì)其病因、病理及臨床診治的研究進(jìn)程。本研究按照不同的指標(biāo)對(duì)PCOS進(jìn)行分組，通過比較PCOS各亞型之間相關(guān)指標(biāo)的差異來全面分析中國漢族PCOS患者各亞型的臨床及內(nèi)分泌代謝特征，為進(jìn)一步深入

2、研究PCOS的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律提供初步的理論依據(jù)。
　　 方法：隨機(jī)選擇2006年9月至2008年2月在山東大學(xué)山東省立醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心門診就診的PCOS患者636例，測(cè)量身高、體重、腰圍和臀圍，計(jì)算體重指數(shù)；用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血中內(nèi)分泌激素、胰島素水平，用生化儀測(cè)定血脂與血糖，計(jì)算HOMA-IR;根據(jù)不同指標(biāo)分組后比較兩組間相關(guān)指標(biāo)的差異。
　　 結(jié)果：(1)在638例PCOS患者中BMI≥25kg/m2者占46.6％；腰

3、圍≥80cm者占62.1％；高雄激素血癥者占85.7％；空腹胰島素異常者為6％，空腹血糖異常者為13.9％，HOMA-IR≥1.66者占51.4％；血CHO異常者占21.3％，血TG異常者占20.8％。血LDL異常者占16.6％;高血壓者占15％。(2)根據(jù)腰圍分組，向心性肥胖組年齡高于非向心性肥胖組，差異具有顯著性;非向心性肥胖組LH、FSH和PRL水平顯著高于向心性肥胖組，差異具有顯著性；非向心性肥胖組E2水平高于向心性肥胖組，處于

4、臨界水平。在OGTT試驗(yàn)中除180分鐘血糖外，向心性肥胖組各時(shí)點(diǎn)血糖水平及胰島素水平均高于非向心性肥胖組，差異具有顯著性；向心性肥胖組的血脂水平以及HOMA-IR顯著高于非向心性肥胖組，差異具有極顯著性。(3)根據(jù)BMI分組后發(fā)現(xiàn)肥胖組年齡高于非肥胖組，差異具有顯著性；非肥胖組LH、FSH、E2和PRL水平顯著高于肥胖組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肥胖組OGTT各時(shí)點(diǎn)血糖水平及胰島素水平高于非肥胖組，差異具有顯著性;肥胖組HOMA-IR顯著高

5、于非肥胖組，差異具有極顯著性；肥胖組血脂水平高于非肥胖組，差異具有顯著性。(4)根據(jù)PCOS患者有無胰島素抵抗分組比較兩組間體重指數(shù)、各時(shí)點(diǎn)血糖、胰島素、血脂、內(nèi)分泌水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IR組BMI、腰圍和臀圍高于非IR組，差異具顯著性，但非IR組LH、FSH水平高于IR組，且差異具顯著性；IR組血脂水平高于非IR組，差異具有顯著性。(5)按PCOS患者空腹睪酮水平分為高雄激素血癥組和無高雄激素血癥組，比較兩組間體重指數(shù)、各時(shí)點(diǎn)血糖、胰島素、

6、血脂、內(nèi)分泌水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高雄激素血癥組LH水平高于非高雄激素血癥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高雄激素血癥組與非高雄激素血癥組比較，各時(shí)點(diǎn)血糖及胰島素水平均無顯著性差異；兩組血脂水平亦無顯著性差異。(6)相關(guān)分析結(jié)果顯示，PCOS患者BMI及腰圍與HOMA-IR呈顯著正相關(guān)；與血T水平?jīng)]有相關(guān)性，與血LH水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系；與血CHO、LDL和TG水平呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)論：(1)PCOS患者存在肥胖、高雄激素血癥、胰島素抵抗

7、、脂代謝異常及高血壓等代謝綜合征的表現(xiàn)。(2)根據(jù)腰圍、BMI和HOMA-IR對(duì)PCOS患者進(jìn)行分組表明兩組間病情的基本特征和嚴(yán)重程度以及代謝并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)存在差異；但是高雄激素血癥組和無高雄激素血癥組比較，除LH水平外其余指標(biāo)均無差異。(3)肥胖尤其是腹型肥胖與PCOS患者的胰島素抵抗關(guān)系密切，與脂代謝異常呈正相關(guān)。(4)PCOS是一種高度異質(zhì)的疾病，不同亞型PCOS患者的臨床特征具有明顯的差異。
　　 第二部分 MCF2L2基

8、因與多囊卵巢綜合征相關(guān)關(guān)系的病例-對(duì)照研究
　　 目的：多囊卵巢綜合征(PCOS)與2型糖尿病具有相似的臨床及病理生理學(xué)特征，二者可能具有共同的發(fā)病基礎(chǔ)，MCF2L2基因與2型糖尿病密切相關(guān)。MCF2L2基因與PCOS的關(guān)系目前尚不明確，本研究旨在探討MCF2L2基因在PCOS發(fā)病中的作用。
　　 方法：采用TaqMan(MGB)探針技術(shù)，檢測(cè)了638例中國漢族PCOS患者和559例與之年齡、種族匹配的對(duì)照者全血中MCF

9、2L2基因三個(gè)變異位點(diǎn)rs35368790，rs35069869和rs684846的多態(tài)性；為避免單一分型方法的誤差，隨機(jī)選取百分之五的研究樣本進(jìn)行直接測(cè)序驗(yàn)證TaqMan(MGB)探針技術(shù)分型的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明兩種方法的重復(fù)率為百分之百。同時(shí)測(cè)定內(nèi)分泌激素、生化指標(biāo)、OGTT，測(cè)量身高、體重、腰圍和臀圍，計(jì)算體重指數(shù)、腰臀比例及HOMA-IR；并按體重指數(shù)、腰圍、胰島素抵抗與否、MCF2L2基因不同位點(diǎn)的基因型分組，分別比較各組間相關(guān)

10、指標(biāo)的差異。
　　 結(jié)果：(1)PCOS患者組和對(duì)照組中的等位基因和基因型分布均符合哈迪-溫伯格平衡。在PCOS患者中MCF2L2基因SNP rs35368790，rs35069869和rs684846的最小等位基因頻率分別為0.115，0.276和0.122，與正常對(duì)照人群的最小等位基因頻率相似(0.114，0.296和0.114)；(2)MCF2L2基因SNP rs35368790，rs35069869和rs684846在對(duì)

11、照組與PCOS組的基因型分布及等位基因頻率均無顯著性差異；但是，采用非條件Logistic多元回歸分析方法在校正年齡、體重指數(shù)、腰圍、臀圍和血壓等混雜因素的影響后發(fā)現(xiàn)SNP rs35368790的基因型在腰圍小于80厘米的對(duì)照組與PCOS組中的分布具有顯著性差異(p=0.0083；OR=1.952，95％CI：1.188～3.206)。(3)卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示SNP rs35069869和rs684846多態(tài)在PCOS肥胖組與非肥胖組、向

12、心性肥胖組與非向心性肥胖組、IR組與非IR組均無顯著性差異，而且各組間等位基因頻率亦無顯著性差異。SNPrs35368790在PCOS肥胖組與非肥胖組基因型分布及等位基因頻率均無顯著性差異；在PCOS向心性肥胖組與非向心性肥胖組基因型分布無顯著性差異，G等位基因頻率卻較對(duì)照組升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.81，p=0.03)；但是在PCOSIR組與非IR組基因型分布及等位基因頻率差異均具有顯著性(x2=6.35，p=0.04；x2

13、=5.61，p=0.02)。(4)協(xié)方差分析結(jié)果顯示，MCF2L2基因SNP rs684846 CC基因型PCOS婦女空腹血糖及HOMA-IR高于TC基因型PCOS婦女，差異具有顯著性(F=6.28，P=0.002;F=4.66，P=0.009)。SNP rs35368790和rs35069869不同基因型PCOS婦女在臨床、內(nèi)分泌激素及代謝特征方面均無顯著性差異。(5)經(jīng)過Haploview4.0分析，SNP rs35368790，r

14、s35069869和rs684846的連鎖不平衡檢驗(yàn)值D'＜0.5，r2＜0.05。
　　 結(jié)論：MCF2L2基因SNP rs35368790與非向心性肥胖PCOS患者顯著相關(guān)，很可能為非向心性肥胖型PCOS的標(biāo)記性位點(diǎn)。在中國漢族人中SNP rs35368790，rs35069869和rs684846不存在連鎖不平衡現(xiàn)象。
　　 第三部分基于家庭MCF2L2基因與多囊卵巢綜合征相關(guān)性研究
　　 目的：本研究采用

15、基于家庭的TDT實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以患者雙親為內(nèi)對(duì)照，排除了人群混雜的干擾與人群分層的偏倚。旨在進(jìn)一步闡明MCF2L2基因SNP rs35368790多態(tài)性與我國漢族PCOS發(fā)病易感性的相關(guān)關(guān)系。
　　 方法：以2007年7月至2009年2月在山東省立醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心門診就診的PCOS患者為先證者，采用三口之家(trios)樣品，即父親、母親與一個(gè)PCOS患者所組成的核心家系為研究對(duì)象。所有152個(gè)三口之家均是來自山東地區(qū)的漢族人，患者

16、的父母均系隨機(jī)婚配，家系之間無血緣關(guān)系；絕大部分家系通過先證者聯(lián)系并通知家系成員到醫(yī)院檢驗(yàn)科完成調(diào)查與采樣，對(duì)于少數(shù)有困難或不積極者由專門的家系調(diào)查小組上門完成資料的收集工作。對(duì)先證者以及先證者的父母抽取血樣保存于-80℃冰箱備用。采用TaqMan(MGB)探針技術(shù)和直接測(cè)序方法對(duì)MCF2L2基因的三個(gè)變異位點(diǎn)rs35368790，rs35069869和rs684846的基因型進(jìn)行分析。結(jié)果：(1)PCOS核心家系中的等位基因和基因型分

17、布均符合哈迪-溫伯格平衡。(2)MCF2L2基因多態(tài)性的家庭傳遞與分布特征：SNP rs35368790位點(diǎn)父母基因型為純合的家庭有94個(gè)，可供分析的有信息的核心家庭為58個(gè)；SNP rs35069869和SNP rs684846位點(diǎn)父母基因型為純合的家庭分別為49和90個(gè)，可供分析的有信息的核心家庭分別為103和62個(gè)。(3)傳遞不平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示在中國漢族人群中，SNP rs35368790的多態(tài)性是不平衡傳遞的(x2=7.118，

18、p=0.008)，由雜合子父母傳遞給患病子代的等位基因頻率差異具有顯著性，G等位基因在患病子代中的傳遞過多；但是，我們沒能檢測(cè)到顯著的傳遞不平衡現(xiàn)象在SNPrs35069869(x2=3.645，p=0.056)以及rs684846(x2=1.429，p=0.232)中。(4)連鎖不平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示rs35368790，rs35069869和rs684846之間不存在連鎖不平衡。
　　 結(jié)論：基于核心家庭的研究進(jìn)一步證實(shí)：MCF