青霉素致癇大鼠海馬各區(qū)NMDAR1表達(dá)特征與癇性發(fā)作機制研究.pdf

1、背景與目的：中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮與抑制的失衡已成為癇性放電機制的共識。種種跡象表明，中樞神經(jīng)系統(tǒng)無論是結(jié)構(gòu)上還是功能上均存在防止神經(jīng)元過度興奮的抑制機制，即存在抑制屏障。因此推測：臨床癇性發(fā)作過程是以興奮性癇性放電實現(xiàn)對抑制屏障的突破為前提的。興奮性氨基酸及其受體在癇性興奮性機制中的作用已被廣泛的認(rèn)同。本實驗研究青霉素致癇大鼠NMDA受體亞單位1(NMDAR1)在海馬各區(qū)及癇性發(fā)作不同時程的表達(dá)特征，從興奮性因素方面探討癇性發(fā)作過程的抑制屏

2、障突破機制。 方法：SD大鼠36只，隨機分成6組，采用青霉素微量注射大鼠海馬制備急性部分性癇性發(fā)作模型(注射點均為右側(cè)海馬)。各組處理如下： 1.正常組(A)：不用青霉素致癇，也不注射生理鹽水，麻醉后直接灌注處死； 2.生理鹽水對照組(NS對照組)(B)：不用青霉素致癇，僅在致癇灶相同位點注入等量生理鹽水； 3.驚厥前期組(C)：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，腦電圖同步跟蹤記錄，當(dāng)腦電圖上顯示有癇性放電，但

3、行為學(xué)無癇性發(fā)作時，視大鼠進(jìn)入驚厥前期，立即灌注處死； 4.驚厥期2小時組(D)：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，當(dāng)出現(xiàn)行為學(xué)癇性發(fā)作癥狀并且Racine分級在2級及其以上時，視致癇鼠進(jìn)入驚厥期。在驚厥期2小時，立即灌注處死； 5.驚厥期6小時組(E)：青霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，當(dāng)出現(xiàn)行為學(xué)癇性發(fā)作癥狀并且Racine分級在2級及其以上時，視致癇鼠進(jìn)入驚厥期。在驚厥期6小時，立即灌注處死； 6.驚厥后期組(F)：青

4、霉素右側(cè)海馬微量注射致癇，出現(xiàn)行為學(xué)癇性發(fā)作癥狀并且Racine分級2級及其以上。當(dāng)癇性發(fā)作終止時，視大鼠進(jìn)入驚厥后期。預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)進(jìn)入驚厥期后24小時癇性發(fā)作基本都停止了，故取進(jìn)入驚厥期后24小時點為驚厥后期觀察點，此時灌注處死；分別在進(jìn)入驚厥期0小時、1小時、2小時、6小時以及驚厥后期(進(jìn)入驚厥期后24小時)對各組大鼠癇性發(fā)作進(jìn)行行為學(xué)Racine分級評估，同時記錄每5分鐘Racine 2級及其以上癇性發(fā)作的發(fā)作次數(shù)，算出每分鐘的發(fā)作

5、次數(shù)即發(fā)作頻率，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。用單導(dǎo)聯(lián)記錄方式跟蹤記錄各組大鼠在驚厥前期、驚厥期2小時、驚厥期6小時以及驚厥后期的腦電圖變化。在相應(yīng)時間點將實驗大鼠灌注處死，斷頭取腦，做連續(xù)冠狀石蠟切片，用免疫組化檢測各組大鼠海馬各區(qū)域(齒狀回、CA3、CA1區(qū))NMDAR1亞單位的表達(dá)水平，所得灰度值各組均數(shù)之間的差異比較采用單因素方差分析(ANOVA)，組間兩兩比較，滿足方差齊性時采用最小顯著性差異法(LSD)；不滿足方差齊性時采用Dunnett

6、’s T3法。 結(jié)果： 1.模型制備結(jié)果:青霉素局部海馬內(nèi)微注射可致癇實驗大鼠，造模成功率為87.5％。 2.行為學(xué)變化比較:①除正常組、生理鹽水對照組、驚厥前期組外，其他三組癇性發(fā)作形式以Racine分級-多肢抽動伴傾倒為主；②不同時間點發(fā)作次數(shù)有差別，統(tǒng)計學(xué)分析表明驚厥期2小時點發(fā)作頻率最高，6小時點發(fā)作頻率較前有下降，說明右側(cè)海馬局部注射青霉素后1～2小時，有一個癇性發(fā)作頻率高峰，以后發(fā)作頻率逐漸減慢。

7、 3.EEG比較:青霉素注射后大鼠腦電均出現(xiàn)多種形式的癲癇性放電，有散在的尖波、棘波及陣發(fā)性和持續(xù)性癲癇波。在2小時點，腦電圖表現(xiàn)為中到高波幅的、持續(xù)性的尖波、棘波、尖慢波、棘慢波。在6小時點，癇性波的發(fā)放頻率和幅度逐漸減弱。在24小時點雖然無臨床上的癇性發(fā)作，但腦電圖上仍可見低波幅的癇性放電。 4.NMDAR1免疫組化結(jié)果:青霉素致癇后，海馬齒狀回、CA1、CA3區(qū)NMDAR1表達(dá)明顯增加；驚厥前期NMDARl表達(dá)增加，驚