青霉素誘導(dǎo)急性癇性大鼠海馬GAD的表達(dá)特征與癲癇發(fā)病機制研究.pdf

1、研究目的：通過觀察GAD65、GAD67在青霉素誘導(dǎo)急性癇性大鼠海馬各時程和各區(qū)域表達(dá)的變化特征，初步探討癇性發(fā)作過程中的“抑制屏障突破機制”。 材料與方法：將36只SD大鼠隨機分為六組：正常組、生理鹽水對照組、驚厥前期組、驚厥期2小時組、驚厥期6小時組及驚厥后期組。對各組大鼠癇性發(fā)作進行行為學(xué)Racine分級評估，同時記錄每5分鐘Racine 2級以上癇性發(fā)作次數(shù)，算出每分鐘的發(fā)作次數(shù)即發(fā)作頻率，進行統(tǒng)計學(xué)分析。用單導(dǎo)聯(lián)記錄方

2、式跟蹤記錄各組大鼠的腦電圖變化。在相應(yīng)時間點將實驗大鼠灌注處死，斷頭取腦，做連續(xù)冠狀石蠟切片，用免疫組化檢測各組大鼠海馬各區(qū)域GAD的表達(dá)水平，所得相對灰度值進行完全隨機設(shè)計資料的方差分析。 結(jié)果： 1.青霉素海馬局部注射成功誘導(dǎo)了急性癇性發(fā)作模型，造模成功率87.5％。 2.行為學(xué)變化正常組、生理鹽水組無癇性發(fā)作。青霉素海馬局部注射約24.88±19.28分鐘后，出現(xiàn)2級及以上癇性發(fā)作。發(fā)作強度：在驚厥期0小時

3、以Racine 2～3級為主；驚厥期1～2小時逐步增強到Racine 4～5級；驚厥期6小時又恢復(fù)到Racine 2～3級；在驚厥后期發(fā)作基本停止。發(fā)作頻率：在驚厥期1～2小時，有一個癇性發(fā)作頻率高峰；在驚厥期6小時逐漸減慢，在驚厥后期幾乎無癇性發(fā)作。 3.腦電圖變化正常大鼠腦電波形頻率以α、β波為主，散在可見θ波，波幅小于75uv。生理鹽水組腦電圖與正常組無明顯差異。青霉素右側(cè)海馬局部注射約14.17±5.92分鐘后腦電圖上逐

4、漸出現(xiàn)多種形式的癇性放電波，主要是散在的陣發(fā)性的尖波、棘波。在驚厥期2小時點，腦電圖表現(xiàn)為中到高波幅的、持續(xù)性的尖波、棘波、尖慢波、棘慢波；在驚厥期6小時點，癇性放電波的頻率和幅度逐漸減弱；在驚厥后期無行為學(xué)癇性發(fā)作，但腦電圖上仍可見低波幅的癇性放電波。 4.免疫組化結(jié)果 4.1. 正常大鼠各區(qū)GAD67的表達(dá)水平分別是：齒狀回82.52±1.94，CA3區(qū)111.12±2.20，CA1區(qū)101.72±1.89，CA3>

5、CA1>齒狀回。注射生理鹽水后，各區(qū)GAD67的表達(dá)無明顯變化 。 右側(cè)海馬局部注射青霉素后CA3區(qū)、CA1區(qū)GAD67的表達(dá)：在驚厥前期明顯增高，與正常對照組相比有顯著差異；在驚厥期2小時又明顯下降；在驚厥期6小時、驚厥后期又逐漸升高。 齒狀回GAD67的表達(dá)：在驚厥前期、驚厥期2小時、6小時與正常組比較，都無顯著性改變；在驚厥后期有顯著性升高。 4.2. 正常大鼠各區(qū)GAD65的表達(dá)水平：齒狀回81.07±1

6、.03，CA3區(qū)98.64±0.72，CA1區(qū)96.44±0.52，CA3>CA1>齒狀回。注射生理鹽水后，各區(qū)GAD65的表達(dá)無明顯變化。 右側(cè)海馬局部注射青霉素后GAD65的表達(dá)：CA3區(qū)、CA1區(qū)、齒狀回在驚厥前期、驚厥期2小時、驚厥期6小時與對照組比較都無明顯變化；在驚厥后期明顯升高。 結(jié)論： 1.青霉素海馬局部注射能成功誘導(dǎo)急性癇性發(fā)作模型。 2.行為學(xué)及電生理學(xué)支持在青霉素誘導(dǎo)的急性癇性發(fā)作模