CD14基因多態(tài)性與嚴重燒傷患者細胞免疫功能改變的相關性研究.pdf

1、目的：有資料提示，基因多態(tài)性可能與膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展有著內在的聯(lián)系。本前瞻性研究通過對嚴重燒傷患者CD14基因啟動子-159位點多態(tài)性進行檢測，初步探討其基因多態(tài)性與患者嚴重感染并發(fā)癥（包括膿毒癥及MODS）的關系，進一步分析不同基因多態(tài)性對嚴重燒傷后細胞免疫功能改變及晚期炎性介質產生的影響，并對其可能的機制進行探討。通過該臨床前瞻性研究，旨在為大面積燒傷后嚴重感染并發(fā)癥的預警與防治提供新線索。
　　方法：（1）采集77例燒傷體表

2、總面積大于30％患者血標本，通過聚合酶鏈反應-限制性片斷長度多態(tài)性方法檢測CD14-159C/T基因多態(tài)性，動態(tài)觀察傷后1、3、5、7、14、21、28天患者T淋巴細胞、CD14+單核細胞免疫功能的改變，并與不同基因型進行比較分析。采用MTT方法檢測外周血T淋巴細胞增殖活性、酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血漿sCD14及淋巴細胞上清液IL-2濃度、RT-PCR方法分析CD14mRNA表達；并應用流式細胞技術檢測淋巴細胞CD4+/CD8+比值、CD

3、4+淋巴細胞凋亡率和CD14+單核細胞表面HLA-DR定量表達（使用QuantiBRITETM抗HLA-DRPE*/抗MonocytePerCP-Cy5.5單克隆抗體）。（2）收集35例燒傷體表總面積大于30％患者血標本，對不同CD14基因多態(tài)性患者分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗、RT-PCR方法檢測HMGB1含量及HMGB1mRNA表達，進一步分析HMGB1含量與細胞免疫指標的相關性。
　　結果：（1）通過對77例嚴重燒傷患者CD14

4、分子的基因型檢測發(fā)現(xiàn)，CC型發(fā)生膿毒癥的幾率（42.9％）較TC（77.6％）、TT（71.4％）型低。其中3例CC純合子膿毒癥患者中，僅1例出現(xiàn)MODS；38例TC雜合子膿毒癥患者19例出現(xiàn)MODS（50％）；而15例TT純合子膿毒癥患者10例出現(xiàn)MODS（66.7％）。（2）在三種基因型患者中，傷后7～21天TT純合子與TC雜合子白細胞中CD14mRNA表達明顯高于純合子CC，三種基因型之間CD14mRNA表達顯著不同（P<0.05

5、或P<0.01），而TT與TC基因型之間差異不明顯。同樣，燒傷后TC、TT基因患者血漿中sCD14濃度較高，其傷后第5天CC基因型血漿sCD14水平顯著低于TC基因型（P<0.01）。（3）燒傷后攜帶TC、TT型患者T淋巴細胞IL-2產生、T淋巴細胞增殖能力一直處于較低水平，而CC型在傷后14天逐漸上升。與CC型患者比較，攜帶TT、TC型患者T淋巴細胞比值普遍降低，尤其在傷后第1、3、14、21、28天差異明顯（P<0.01）。TT、T

6、C型患者CD3+CD4+T細胞凋亡率均較高，TT型患者傷后第5、7、21天凋亡率顯著高于CC型患者（P<0.05），TC型患者傷后7、14天其凋亡率高于CC型患者（P<0.05）。進一步分析可見，傷后第3、14、21天CC純合子患者HLA-DR表達量均明顯高于TT純合子（P<0.05），而與TC型比較沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）。（4）TT、TC型患者血漿中HMGB1的含量傷后14、21、28天均顯著高于CC純合子（P<0.05）；而

7、傷后14天攜帶TT、TC基因型HMGB1mRNA表達與CC基因型存在顯著差異（P<0.05），其他時間則無明顯差異。（5）血漿中HMGB1含量與T淋巴細胞增殖活性、IL-2水平、CD4+/CD8+比值、單核細胞HLA-DR表達量呈一定程度負相關（P<0.05或P<0.01），而與CD4+凋亡率、sCD14含量呈正相關（P<0.05或P<0.01）。
　　結論：（1）大面積燒傷后CD14基因啟動子-159位點多態(tài)性TT基因型可能是燒