藥物對細菌脂多糖誘導的BV2小膠質細胞的抗作用及其機制的研究.pdf

1、小膠質細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中常駐的巨噬樣細胞，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫反應中發(fā)揮著核心作用。在損傷或感染因素如細菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）等的刺激下，小膠質細胞被迅速激活?；罨男∧z質細胞可誘導蛋白酶的激活，釋放各種促炎性細胞因子和谷氨酸，并生成大量活性氧和活性氮，導致周圍其他神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞受損和丟失。小膠質細胞的激活參與了很多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展。因此，目前很多研究都在試圖通過抑制小膠質細胞的激活來

2、治療神經(jīng)退行性疾病。
　　納洛酮（na lo xo ne）是一種阿片類受體拮抗劑，而右旋美沙芬是阿片類受體激動劑。它們都被證實具有神經(jīng)保護作用，但其機制目前尚不十分清楚。研究旨在闡明納洛酮和右美沙芬是否可以通過抑制 LPS（細菌脂多糖）激活的BV2小膠質細胞炎癥因子的釋放而起到神經(jīng)保護作用。結果顯示納洛酮和右美沙芬都顯著地抑制了BV2小膠質細胞內熱休克蛋白60（HSP60）的表達及釋放。我們假設被小膠質細胞釋放至胞外的HSP60可

3、以與Toll-like receptor-4（TLR-4）結合，激活NF-κB（nuclear factor-kappab）和caspase-3，從而誘導各種細胞因子的釋放而產(chǎn)生炎癥反應。于是檢測了兩種藥物對LPS誘導的BV2細胞內TLR-4，NF-κB和caspase-3的活性的影響。結果發(fā)現(xiàn)它們顯著抑制了TLR-4，NF-κB和caspase-3的表達。同時，細胞中的炎癥因子NO，iNOS，IL-6，IL-1β，TNF-α的釋放都被

4、抑制了。這些結果提示納洛酮和右美沙芬可抑制小膠質細胞的激活，它們的抗炎作用可能是通過抑制HSP60-TLR-4-NF-κB信號通路而發(fā)揮的。
　　研究目的：
　　明確藥物（納洛酮和右美沙芬）對于LPS激活的BV2小膠質細胞的抑制作用，并探討藥物發(fā)揮抗炎作用的分子機制，從而明確這些藥物在小膠質細胞介導的炎癥反應中的作用。
　　研究方法：
　　1首先對體外培養(yǎng)的BV2小膠質細胞進行不同濃度的藥物處理后，通過CCK8實

5、驗檢測藥物對LPS誘導的BV2小膠質細胞活性的影響。
　　2同時，通過Western blot和免疫熒光染色技術檢測LPS誘導的BV2小膠質細胞內HSP60，HSF1，iNOS，caspase-3，NF-κB和TLR-4的表達情況。
　　3通過ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）檢測細胞培液上清中的炎癥因子IL-6，IL-1β，TNF-α和HSP60的含量；通過iNOS活力的測定和Griess Reagent檢測細胞培液上清中iN

6、OS的活力和NO的含量。
　　主要結果：
　　1 CCK8檢測結果提示，與對照組相比，單獨LPS處理BV2小膠質細胞后，細胞的活性明顯降低，將不同濃度的藥物與LPS誘導的BV2小膠質細胞共孵育24小時后，隨著濃度的增加，明顯地提升了LPS誘導的BV2小膠質細胞的活性。
　　2通過Western blot和免疫熒光法檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，LPS單獨處理BV2小膠質細胞后，細胞內的HSF1，HSP60，iNOS，casp

7、ase-3，NF-κB，TLR-4的表達水平明顯上調；藥物組有效抑制了LPS誘導的這些蛋白的表達，提示藥物可能通過抑制HSP60-TLR-4-NF-κB信號通路而發(fā)揮抗炎癥反應。
　　3通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，LPS處理BV2小膠質細胞后，細胞上清液中的炎癥因子IL-6，IL-1β，TNF-α和HSP60明顯增多，而藥物組有效抑制了LPS激活的BV2小膠質細胞炎癥因子的釋放。
　　4通過Griess Reage