龍血竭抑制脂多糖誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的作用研究.pdf

1、小膠質(zhì)細(xì)胞（Microglia）異?；罨閷?dǎo)的神經(jīng)炎癥與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)。小膠質(zhì)細(xì)胞異?；罨尫虐捉樗?1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）等多種炎癥因子。上述炎癥因子的持續(xù)大量釋放，會(huì)直接損傷神經(jīng)元，或進(jìn)一步激活小膠質(zhì)細(xì)胞形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致神經(jīng)元逐漸退行性改變或死亡而發(fā)生阿爾茨海默病（AD）、帕金森?。≒D）等神經(jīng)退行性疾病。因此，對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞異?；罨M(jìn)行有效的抑制已成為抗AD、PD藥物研究的極具潛力的靶標(biāo)。

2、>　　本課題研究組前期研究首次發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)中藥龍血竭（LXJ）具有顯著的小膠質(zhì)細(xì)胞活化的抑制作用，且在發(fā)揮作用的濃度下未表現(xiàn)出明顯毒性。以活性為導(dǎo)向從活性部位中分離鑒定了20個(gè)單體化合物，初步的活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示：8號(hào)單體化合物(LXJ-8)的活性較強(qiáng)、且含量較高。本文在此基礎(chǔ)上，采用脂多糖（LPS）所誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的模型，綜合運(yùn)用Real time PCR、Western-blot、ELISA、免疫熒光等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，系統(tǒng)研究LXJ-8抑

3、制小膠質(zhì)細(xì)胞異常活化的作用及其可能機(jī)制。
　　Griess實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LXJ-8（10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞NO的釋放，ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的釋放，LXJ-8（10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞IL-6的釋放。Real time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能夠顯著抑制LP

4、S所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）mRNA的表達(dá)，LXJ-8（10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1βmRNA的表達(dá)，LXJ-8（1，10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞IL-6 mRNA的表達(dá)。Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LXJ-8(100μM)能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞TLR4蛋白的表達(dá)。進(jìn)而針對(duì)絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）家族及Akt通路進(jìn)行了研究

5、，結(jié)果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞p-JNK、p-p38的蛋白表達(dá)，對(duì)p-ERK的表達(dá)無(wú)明顯作用。LXJ-8（1，10μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi)c-Jun蛋白的表達(dá)。LXJ-8（1，10，100μM）對(duì)LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞p-Akt蛋白的表達(dá)無(wú)明顯影響。Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能夠顯著抑制LPS所致 N9小膠質(zhì)細(xì)胞

6、 p-I?B?蛋白的表達(dá)，并顯著逆轉(zhuǎn) I?B?蛋白的降解；免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LXJ-8（100μM）能夠顯著抑制LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞所致的NF-κB p65蛋白的核轉(zhuǎn)位。上述結(jié)果提示，LXJ-8對(duì)LPS所致N9小膠質(zhì)細(xì)胞活化的抑制作用可能與其對(duì)NF-?B、MAPKs信號(hào)通路的抑制作用有關(guān)。
　　綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)，LXJ-8能夠顯著抑制 LPS所致小膠質(zhì)細(xì)胞 NO、IL-6、IL-1β的釋放及 iNOS、IL-6、I