輪狀病毒致乳鼠感染后肝臟損害及細胞因子表達水平的實驗研究.pdf

1、目的：1.建立輪狀病毒(Rotavirus，RV)腸道內(nèi)、腸道外感染的BALB/C乳鼠模型。2.檢測乳鼠外周血IL-12(Th1類細胞因子）和IL-10（Th2類細胞因子）的表達水平，比較IL-10，IL-12兩種細胞因子在不同時間點，以及在RV腸道內(nèi)、腸道外感染中表達的差異，從而進一步了解Th1/Th2失衡與RV腸道外臟器損害的相關性，為臨床上防治重癥RV感染提供新的思路和方法。3.觀察RV感染后，乳鼠的臨床表現(xiàn)和不同時間點肝臟組織的

2、形態(tài)學改變，了解其病理損害的特點。
　　方法：將恒河猴RV SA11株分裝，置-80℃冰箱冷藏備用。選用3～4日齡清潔級BALB/C乳鼠90只，隨機分成3組，每組30只，即正常對照組：不做任何特殊處理；腸道內(nèi)組：經(jīng)口腔滴注100μl SA11株病毒培養(yǎng)液（病毒滴度TCID50為1×10-4）；腸道外組：經(jīng)腹腔注射100μl SA11株病毒培養(yǎng)液。病毒接種后，各組乳鼠隔離飼養(yǎng)。以接種當天為第0天計，每日觀察乳鼠的精神狀態(tài)、活動情況、

3、體型、毛色光澤度、大便變化情況以及有無皮膚脫水及肛門紅腫等，收集乳鼠大便檢測其中輪狀病毒抗原。分別于RV感染后的第3天和第8天，收集乳鼠外周血，離心后留取血清，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法檢測細胞因子IL-10和IL-12的表達水平。同時處死乳鼠，留取肝臟組織，蘇木精－伊紅（HE）染色，光鏡下觀察肝臟組織的病理改變。
　　結果：1.RV感染后乳鼠食欲不佳，精神萎靡，反應差，皮膚皺褶，腹部腫脹，肛門紅腫，生長發(fā)育緩慢，并出現(xiàn)腹

4、瀉，表現(xiàn)為大便次數(shù)和大便量增多。在RV感染后第3天，腹瀉達最高峰，以后逐漸減輕，至第8天基本恢復正常。感染組乳鼠大便RV抗原檢測均為陽性。2.RV感染后第3天，腸道內(nèi)組和腸道外組乳鼠血清中IL-12表達水平較正常對照組顯著升高（P<0.01、P<0.01），但腸道內(nèi)、外組間IL-12的表達水平無差異性（P＞0.05）；至RV感染后第8天，腸道內(nèi)、外組IL-12水平均有所下降，但仍高于正常對照組（P<0.05、P<0.01）。腸道外組IL

5、-10水平在RV感染后第3天高于腸道內(nèi)組和正常對照組（P<0.05、P<0.01），至第8天降至正常范圍，三組間無顯著性差異（P＞0.05）。在整個實驗過程中，腸道內(nèi)組IL-10表達水平無顯著性改變（P＞0.05）。3.光鏡下肝細胞體積增大，胞質(zhì)疏松透明，細胞核分裂甚至消失，肝細胞壞死，空泡樣變性明顯，可見大量淋巴細胞浸潤。并且，腸道外組乳鼠肝臟病理損傷程度較腸道內(nèi)組重。
　　結論：1.RV腸道內(nèi)、腸道外感染BALB/C乳鼠模型建