多種因素對新生兒臍血單個核細胞及細胞因子表達水平影響的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:機體在長期進化過程中,產生了兩套免疫系統(tǒng),即天然免疫和獲得性免疫。天然免疫是抵御病原微生物的第一道防線。單個核細胞(mononuclear cells)主要包括單核細胞和淋巴細胞,兩者都是免疫反應中重要的細胞。新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟,尤其是先天免疫發(fā)育不健全,Th1/Th2細胞比例失衡,免疫反應向Th2傾斜,易患各種變態(tài)反應性疾病。研究證實,母乳中含有許多重要的抗體及細胞因子,對新生兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育成熟具有重要的作用。而腸道菌群

2、也具有促進免疫系統(tǒng)成熟之功效,可促進免疫活性細胞分泌細胞因子、維持Th1/Th2型細胞反應平衡、誘導免疫應答或免疫耐受。
   本研究采用細胞培養(yǎng)技術及酶聯(lián)免疫吸附技術以塵螨變應原、初乳及雙歧桿菌為刺激物,觀察其對新生兒臍血單個核細胞形態(tài)學和免疫學變化的影響:1.觀察無刺激及塵螨變應原刺激后對臍血單個核細胞形態(tài)學的影響和對細胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10表達水平及IFN-γ/IL-4比值的影響,探討新生兒免疫網絡特點及變

3、應原刺激后新生兒免疫網絡的變化;2.觀察初乳、雙歧桿菌刺激后對臍血單個核細胞形態(tài)學的影響和對細胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10表達水平及IFN-γ/IL-4比值的影響,探討其對新生兒免疫網絡的影響及對塵螨刺激后的免疫狀況的影響。研究結論為堅持母乳喂養(yǎng)及圍生期服用益生菌對新生兒以后發(fā)生過敏性疾病的影
   方法:選取正常足月新生兒臍血32例,其中母親有過敏史且塵螨變應原皮試陽性者15例,母親無過敏史且塵螨變應原皮試陰性者17

4、例。每份血樣均采用甲基纖維素沉降臍血紅細胞,利用Ficoll密度梯度法分離出單個核細胞。置入24孔培養(yǎng)板中的6孔,各孔再分別加入PBS(空白對照)、塵螨變應原+PBS、初乳、雙歧桿菌液、塵螨變應原+初乳、塵螨變應原+雙歧桿菌液。培養(yǎng)96小時觀察各孔細胞形態(tài)學變化并取各孔細胞培養(yǎng)上清液,用ELISA法檢測IFN-γ、IL-4、IL-10濃度。統(tǒng)計學利用SPSS13.0版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計計算。采用方差分析和t檢驗,結果用均數(shù)±標準差(x±s

5、)表示,以α=0.05為檢驗顯著性標準。
   結果:
   1.塵螨變應原、初乳及雙歧桿菌刺激后,臍血單個核細胞趨向于分化、增殖。
   2.塵螨變應原、初乳及雙歧桿菌刺激臍血單個核細胞后,各組細胞存活率無顯著差異(P>0.05),均>90%。
   3.過敏組、非過敏組臍血單個核細胞細胞因子表達水平及IFN-γ/IL-4比值的比較。
   AD組與NAD組IFN-γ表達比較無統(tǒng)計學差異(P>0

6、.05):AD組IL-4表達水平高于NAD組(P<0.05);AD組IL-10表達水平低于NAD組(P<0.05);AD組IFN-γ/IL-4比值低于NAD組(P<0.05)。
   4.過敏組多種因素刺激后臍血單個核細胞細胞因子表達水平和IFN-γ/IL-4比值的比較。
   塵螨刺激后,與無刺激比較:IFN-γ表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IL-4表達增高(P<0.05),IL-10表達降低(P

7、N-γ/IL-4比值降低(P<0.05)。
   初乳刺激后,與無刺激比較:IFN-γ表達增高(P<0.05),IL-4表達降低(P<0.05),IL-10表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IFN-γ/IL-4比值增高(P<0.05)。
   雙歧桿菌刺激后,與無刺激比較:IFN-γ表達增高(P<0.05),IL-4表達降低(P<0.05),IL-10表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IFN-γ/IL-4比值增高(P<0

8、.05)。
   塵螨+初乳刺激后,與塵螨刺激后比較:IFN-γ表達增高(P<0.05),IL-4表達降低(P<0.05),IL-10表達及IFN -γ/IL-4比值增高(P<0.05)。
   塵螨+雙歧桿菌刺激后,與塵螨刺激后比較:IFN-γ表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IL-4表達降低(P<0.05),IL-10表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IFN-γ/IL-4比值增高(P<0.05)。
   5.

9、非過敏組多種因素刺激后臍血單個核細胞細胞因子表達水平和IFN-γ/IL-4比值的比較。
   塵螨刺激后,與無刺激比較:IFN-γ、IL-4表達水平均無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IL-10表達降低(P<0.05),IFN-γ/IL-4比值無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
   初乳刺激后,與無刺激比較:IFN-γ表達增高(P<0.05),IL-4、IL-10表達均降低(P<0.05),IFN-γ/IL-4比值增高(P<0

10、.05)。
   雙歧桿菌刺激后,與無刺激比較:IFN-γ表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IL-4表達降低(P<0.05),IL-10表達及IFN-γ/IL-4比值均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
   塵螨+初乳刺激后,與塵螨刺激后比較:IFN-γ表達增高(P<0.05),IL-4、IL-10表達均無統(tǒng)計學差異(P>0.05),IFN-γ/IL-4比值增高(P<0.05)。
   塵螨+雙歧桿菌刺激后,與塵螨

11、刺激后比較:IFN-γ、IL-4、IL-10表達水平及IFN-γ/IL-4比值均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
   結論:
   1.塵螨變應原、初乳及雙歧桿菌刺激臍血單個核細胞均促進其分化增殖,并不影響其存活率。
   2.遺傳因素對新生兒免疫系統(tǒng)產生一定作用,有過敏史母親新生兒Th2水平高于其母親無過敏史者,Th1/Th2處于更加不平衡狀態(tài),研究數(shù)據(jù)表明有過敏性家族史者免疫系統(tǒng)更不完善。
   3.

12、新生兒接觸塵螨后,有過敏家族史者Th2水平明顯上調;無過敏件家族史者Th1、Th2變化不明顯,表明遺傳易感者生后受到抗原刺激后更易導致過敏。
   4.無論母親是否為過敏體質,母乳均有調節(jié)新生兒Th1/Th2平衡作用,且對接觸塵螨變應原后的Th1/Th2失衡有一定糾正作用,對促進新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育、成熟發(fā)揮重要作用。
   5.無論母親是否為過敏體質,雙歧桿菌具有調節(jié)新生兒Th1/Th2平衡作用,并對接觸塵螨變應原后造成

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