Toll受體在急性輪狀病毒腸炎乳鼠動(dòng)物模型中的表達(dá)研究.pdf

1、研究背景：
　　輪狀病毒(Rotavirus,RV)是引起世界范圍內(nèi)嬰幼兒嚴(yán)重脫水性腹瀉的主要病原體,每年約50-60萬(wàn)兒童因感染輪狀病毒死亡。腸粘膜是防止病原微生物進(jìn)入機(jī)體的第一道屏障,病毒等病原菌感染腸上皮后,天然免疫防御系統(tǒng)立即被激活,導(dǎo)致I、III型干擾素(IFNs)和其它細(xì)胞因子瀑鏈?zhǔn)结尫?抑制其在腸上皮上的復(fù)制。
　　目的：
　　本課題通過(guò)建立輪狀病毒腸炎動(dòng)物模型,檢測(cè)急性輪狀病毒腸炎中乳鼠小腸粘膜Toll

2、受體(TLRs)的mRNA表達(dá)水平,探討乳鼠RV感染后天然免疫應(yīng)答特點(diǎn),為建立輪狀病毒感染有效預(yù)防和治療的方法提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)選用70只昆明乳鼠,共4窩,隨母鼠按窩隨機(jī)分為2組:RV感染組(34只)和正常對(duì)照組(36只),經(jīng)灌胃感染建立RV乳鼠腹瀉模型。觀察各組乳鼠的臨床癥狀、生長(zhǎng)發(fā)育情況。輪狀病毒感染后第3d和6d分別處死各組乳鼠(RV感染組12只,正常對(duì)照組15只),無(wú)菌操作下留取小腸標(biāo)本,RV感染組

3、另外6只乳鼠繼續(xù)觀察臨床癥狀。光鏡觀察小腸組織病理學(xué)改變;采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)乳鼠小腸TLRs、IFN-γmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.RV攻擊后乳鼠的臨床癥狀:實(shí)驗(yàn)組昆明乳鼠在感染RV24h后相繼出現(xiàn)腹瀉癥狀,表現(xiàn)為糞便含水量增多(黃色糊狀便或黃色水樣便)、腹脹、精神欠佳、活動(dòng)量少、皮膚有皺褶,同時(shí)體重不增。第3-4天出現(xiàn)腹瀉高峰,但未出現(xiàn)典型的水樣便,第10天完全恢復(fù)正常,10天后體重開(kāi)始增

4、長(zhǎng),速率同對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中實(shí)驗(yàn)組有4只乳鼠死亡。正常對(duì)照組無(wú)腹瀉癥狀,精神、活動(dòng)良好,皮膚光澤。體重增長(zhǎng)良好,每天平均增長(zhǎng)0.2g。
　　2.小腸組織光鏡下形態(tài)變化:RV感染組突出的病理改變?yōu)槟c上皮細(xì)胞明顯腫脹,可見(jiàn)空泡樣變性,少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),而增生、壞死、絨毛萎縮脫落改變不明顯,隱窩細(xì)胞未見(jiàn)改變,而對(duì)照組未見(jiàn)任何病理改變。
　　3.RV感染后3d、6d后乳鼠小腸粘膜TLR2～9、IFN-γmRNA的表達(dá)水平:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯

5、示,與正常對(duì)照組比較,起病在3d以內(nèi)的輪狀病毒腸炎乳鼠小腸粘膜TLR2,4,7,8,9,IFN-γmRNA表達(dá)水平降低,但均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p大于0.05),TLR3表達(dá)增高,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p大于0.05);在感染6d后,與正常對(duì)照組比較,RV感染組腸粘膜粘膜TLR2,3,4,7,8,9,IFN-γmRNA表達(dá)水平均降低,但都沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p大于0.05);與發(fā)病3d比較,感染6d后RV感染組、正常組腸粘膜粘膜TLR2,3,4,7,