水溶性殼聚糖對(duì)1型糖尿病小鼠的免疫治療作用.pdf

1、1型糖尿病(Type1 diabetes mellitus，T1DM)，又稱胰島素依賴性糖尿病，是由T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫系統(tǒng)對(duì)胰腺內(nèi)胰島素分泌細(xì)胞β細(xì)胞進(jìn)行特異性損傷而引起的一種器官特異性的自身免疫疾病。近年來(lái)隨著人們生活水平的提高及環(huán)境因素的改變，糖尿病發(fā)病率逐漸增加，嚴(yán)重危害患者的身心健康。T1DM的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，自身免疫系統(tǒng)的T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞以及由這些免疫細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子和產(chǎn)生的自由基等在T1DM的發(fā)病

2、過(guò)程中起到了非常重要的作用。越來(lái)越多的證據(jù)也表明機(jī)體內(nèi)部Th1/Th2平衡被打破并偏向 Th1極化是T1DM發(fā)病的重要原因之一。
　　殼聚糖(Chitosan)是自然界存在非常豐富的一類自然資源，廣泛存在于蝦蟹等海洋生物的外殼中、各種昆蟲(chóng)的表皮和軟體動(dòng)物的骨骼及殼中。其在諸多領(lǐng)域如生物工程、食品、藥理學(xué)等具有廣泛應(yīng)用。殼聚糖具有抗菌、抗腫瘤、消除氧自由基、降血糖及免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，作為一種良好的抗糖尿病試劑，它可以有效地增加

3、機(jī)體的新陳代謝，增加機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性，同時(shí)它具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性，但是至今為止，關(guān)于殼聚糖對(duì)T1DM這種自身免疫性疾病的免疫治療方面的作用卻少有報(bào)道。因此，為了研究水溶性殼聚糖(Water Soluble Chitosan，WSC)對(duì)T1DM的免疫治療作用，本實(shí)驗(yàn)利用多次小劑量 STZ(Multiple low dose-STZ，MLD-STZ)注射的方法建立T1DM小鼠模型，對(duì)建模成功的T1DM小鼠給予 WSC，檢測(cè)小鼠胰腺、脾

4、臟外周血中相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，以期驗(yàn)證水溶性殼聚糖對(duì)T1DM的免疫治療作用，并為糖尿病的臨床治療提供新的思路和理論依據(jù)。
　　首先，本實(shí)驗(yàn)利用MLD-STZ的方法成功建立了T1DM小鼠模型，并分別對(duì)STZ注射后第7天和第14天小鼠的各項(xiàng)生理指標(biāo)、胰腺的病理形態(tài)及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示：MLD-STZ注射后第14天時(shí) STZ注射小鼠平均血糖已穩(wěn)定在20mmol/l左右，并且伴隨著高血糖的發(fā)生在小鼠胰島中可以明顯觀

5、察到大量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)以及其對(duì)胰島正常結(jié)構(gòu)的破壞。在MLD-STZ注射后第7天時(shí)和14天時(shí)，小鼠胰腺和脾臟相關(guān)Th1細(xì)胞因子(IFN-γ和TNF-α)的表達(dá)即顯著升高，胰腺中Th2細(xì)胞因子 IL-4水平在14天時(shí)顯著下降，胰腺、脾臟及外周血中IFN-γ/IL-4比例均顯著升高，表明此時(shí) STZ注射小鼠體內(nèi) Th1/Th2平衡已被打破并偏向 Th1極化發(fā)展。
　　對(duì)建模成功的T1DM小鼠給予連續(xù)12周 WSC處理，通過(guò)相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

6、發(fā)現(xiàn)，WSC能夠顯著降低T1DM小鼠的血糖，并且能夠有效的減輕T1DM小鼠胰腺內(nèi)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，對(duì)胰島β細(xì)胞起到了一定的保護(hù)作用。胰島素免疫組化也顯示 WSC處理組顯著增加了T1DM小鼠胰腺內(nèi)胰島素免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量。Real-time RT-PCR和ELISA檢測(cè)表明WSC能夠有效的降低T1DM小鼠體內(nèi) Th1細(xì)胞因子 IFN-γ的表達(dá)，同時(shí)也能夠調(diào)節(jié) TNF-α及相關(guān) Th2細(xì)胞因子的表達(dá)，有效的降低了T1DM小鼠體內(nèi)的IFN-