萘酰亞胺—多胺綴合物4W體外抗腫瘤作用機制研究.pdf

1、實驗?zāi)康?
　　由于腫瘤細胞與正常細胞對天然多胺需求的巨大差異,使天然多胺成為良好的腫瘤靶向性載體。萘酰亞胺類化合物對DNA有良好的嵌入性能,腫瘤細胞與正常細胞的DNA存在差異性,可以起到一個靶向治療作用,因此,萘酰亞胺-多胺綴合物能產(chǎn)生良好的靶向抗腫瘤作用。PI3K/Akt信號通路是細胞內(nèi)重要信號轉(zhuǎn)導通路之一,通過影響下游多種效應(yīng)分子的活化狀態(tài),在細胞內(nèi)發(fā)揮抑制凋亡、促進增殖的關(guān)鍵作用,與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本文主要

2、研究新型萘酰亞胺-多胺綴合物4W誘導人轉(zhuǎn)染Akt1結(jié)腸癌細胞與正常結(jié)腸癌細胞在增殖、分化、存活、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面的影響,并做了相應(yīng)分子機制的探討。
　　實驗方法:
　　以人結(jié)腸癌細胞HCT116為研究對象,通過基因轉(zhuǎn)染把Akt1基因轉(zhuǎn)入HCT116細胞內(nèi),通過細胞生長能力檢測,克隆形成檢測,細胞運動能力檢測,來研究Akt1對HCT116細胞的影響。通過MTT法來檢測4W的抗腫瘤活性,通過AO/EB, PI/Hoechs

3、t33342, RH123/ Hoechst33342, Lyso-Tracker Red/ Hoechst33342,ROS/Hoechst33342熒光染色法檢測4W對細胞的凋亡的影響,通過transwell小室實驗,研究4W對細胞遷移和侵襲的影響,通過免疫印跡法來檢測Bcl-2家族,細胞色素c,MMP家族等相關(guān)的蛋白的表達,并對其相互關(guān)系進行了分析。
　　實驗結(jié)果:
　　轉(zhuǎn)染過Akt1的HCT116細胞與正常的HCT1

4、16結(jié)腸癌細胞相比,細胞生長、增殖能力有所提高,細胞運動能力有所降低,通過4W對兩種細胞處理,發(fā)現(xiàn)對其都有生長抑制作用,并且凋亡呈時間劑量依賴性,但轉(zhuǎn)染的細胞對于藥物有更好的耐受。通過transwell小室的遷移和侵襲實驗,發(fā)現(xiàn)4W能抑制結(jié)腸癌細胞的遷移和侵襲,呈時間劑量依賴性。通過熒光染色實驗,發(fā)現(xiàn)4W能誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡。通過免疫印跡實驗,4W能夠引起Caspase家族的活化,細胞色素c的釋放, Bcl-2家族活化,誘導細胞凋亡,